用MALDI-TOF质谱与电子光谱研究纳米胰岛素核-铁蛋白的构建技术与特性.pdfVIP

V01．28 高等学校化学学报 No．11 200 CHEMICALOFCHINESEUNIVERSrrlES 7年11月 JOURNAL 2073—2077 用MALDI—TOF质谱和电子光谱研究纳米 胰岛素核-铁蛋白的构建技术和特性 黄河清。2…，陈平1，朱斌琳1，林青1，罗联忠‘ (1．厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室， 2．化学化工学院物理化学固体表面国家重点实验室，化学生物学福建省藿点实验室， 3．海洋与环境学院近海海洋环境科学国家重点实验室，厦门361005) femtln 摘要小批量制备了电泳纯鲨鱼肝铁蛋白(Liver of@hyma∞鄂ew，szLF)．用透射电子显微镜技术 研究SZLF的铁核和蛋白壳砸基解离和重组过程．用盐酸解离(pH=1．5)和分离膜透析技术制备铁蛋白亚 SZLF分子结构的真实性．提出铁蛋白亚基包裹INS构建为纳米1NS核一铁蛋白的途径． 关键词铁蛋白；纳米包裹；纳米胰岛素棱；多肽；质谱分析 中图分类号0629．7；0621；Q6文献标识码A 文章编号0251-0790(2007)11-2073-05 不同来源的铁蛋白分子结构均由蛋白壳、铁核和横跨蛋白壳的隧道组成“01．多数铁蛋白分子均 由24个高对称性亚基组成球状结构，其中哺乳动物铁蛋白由H和L类型亚基组成，细菌铁蛋白和 sZLF均由单类型亚基组成”4o．铁蛋白的H亚基主要是负责铁的矿化和铁核晶体形成，而L亚基的作 用是提供酸性残基以促进或加速铁的成核”1．由于动植物及微生物在新陈代谢过程中对铁需求量和速 率不同，使不同来源的铁蛋白亚基类型、一级结构同源性和控制铁的释放动力学特性均存在差异，例 如人血清铁蛋白作为重大疾病诊断标志物的可靠性和铁蛋白亚基类型、亚基之间的比例不同等”4’“． 铁蛋白的物质交换隧道宽度约为0．3—0．4nm，可作为无机铁和磷酸盐出入通道，但分子尺寸大 于隧道宽度的还原型黄素腺嘌呤单核苷酸(FMNH：)、还原型黄素腺嘌呤二核苷酸(FADH：)、维生素c 和二羟基延胡索酸等有机小分子同样也能穿梭于隧道且参与释放铁反应，因而推测该隧道的宽度约在 0．7 nm以上．置换反应研究表明，铁蛋白的铁核可被置换成锰核、钴核或铀核，并用于治疗肿瘤疾 病”o或研制高容量光盘．铁蛋白反应器可直接捕获流动水体中的中性红、劳氏紫及各种有机磷农药等 有机小分子，并用于连续监测流动水体的污染程度，推测这一捕获过程中，铁蛋白亚基之间出现瞬间 错位，形成了比o．7nm更宽的隧道通道”1．用于MALDI-TOF质谱的激光和基质可有效地解吸铁蛋白 亚基，并形成亚基离子，供质谱分析”…．采用亚基解离与重组途径可直接捕获抗肿瘤药物14羟基正 的机理尚不清楚．本文选用透射电子显微镜、MALDI-TOF质谱和电子光谱技术研究铁蛋白包裹INS为 纳米多肽核的途径和机理，阐明铁蛋白作为药物载体的可行性和应用价值． 1实验部分 1．1仪器与试剂 超滤离心管截留分子量分别为10k¨和100k斗；基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱仪 (MALDI—TOF 收稿日期：2007．02．26． 基金项目：国家自然科学基金(批准号和厦门大学预研基金(批准号：xdkjex200510009)资助． 联系人简介：黄河清，男，教授，博士生导师，从事蛋白质结构与功能研究．E-m缸l：l-qhunng@珊u．edu曲 万方数据万方数据 2074 V0l 高等学枝化学学报 28 离纯化铁蛋白所需求的试剂均为上海生物工程公司和Sigma公司的色谱纯产品． 1．2铁蛋白的制备和鉴定 鲨鱼铁蛋白(SZLF)的提取、分离、纯化和浓缩参考Kong等“”的方法迸行．铁蛋白分子量和迁移 备．铁蛋白含量采用考马斯蓝法测定．铁蛋白铁