蛋白质组学技术鉴定及分析三七粉诱导海兔神经连索表达的差异蛋白质.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第5期 Chinese of 577～582 2008年5月 Journal AnalyticalChemistry 蛋白质组学技术鉴定与分析 三七粉诱导海兔神经连索表达的差异蛋白质 冯丽剑1 黄琳1，3 卓慧钦1，2 黄河清“，2，3 (1厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室． 2化学化工学院固体表面物理化学国家重点实验室，3化学生物学福建省重点实验室，厦门361005) leachii 诱导前后所表达的差异蛋白质。通过优化双向凝胶电泳分离NLCS神经连索全蛋白质组技术，获得496个蛋 白质斑点。采用肽指纹图谱技术和数据库检索比对法，初步鉴定了NLCS受三七粉提取液诱导前后，其神经 连索表达13个差异蛋白质，其中较高的匹配率蛋白质为肌动蛋白、3．羟酯酰辅酶A脱氢酶、ATP结合转运子 和甲基转移酶12。选用LOCtree软件对13个差异蛋白质进行亚细胞定位。认为它们在保护神经系统中发挥 重要的调节作用。 关键词三七，皂甙，差异蛋白质，分离，鉴定，蛋白质组技术 1 引 言 三七(panaxnotoginseng)属于五加科植物。三七总皂苷(panaxnotoginsengsaponins，PNS)是三七的 主要生物活性成分之一，它具有抗氧化、抑制细胞内Ca超载、调节神经系统、增加免疫功能等生理功 效。三七总皂甙主要皂苷成分与人参较为相似，即人参二醇型皂甙Rbl、人参三醇型皂甙Rgl、Re和三 七皂甙R1等，其总含量高于人参。体内和体外实验表明。三七总皂甙可通过清除体内氧自由基和NO 含量，减少脂质过氧化ll。J，降低细胞内ca2+含量H’5J，增加Ach的合成和M型Ach受体，抑制神经细 胞凋亡【6J，发挥促智和延缓衰老作用。目前，三七皂甙的生理作用研究主要借助组织免疫学和细胞生 物学手段。 海兔神经系统约有20000个神经细胞，各神经节分离，由神经连索连通。海兔神经细胞体积较大 便于分析。多数海兔品种的中枢神经系统(CNS)均由口腔神经节(buccalganglion，BG)、大脑神经节 (cerebral ganglion，CG)、胸膜与足部神经节(pleural—pedal gan． cirrosus glion，AG)和神经连索组成。但厦门蓝斑背肛海兔(加￡口rc邺leachii NLCS的CNS中的胸膜神经节延伸的神经连索直接与背部肌肉相连，这一现象不同于加洲海兔的腹神 经节连接方式。在海兔CNS中，神经连索起着神经节之间或者神经节和效应器官之间物质运输与传递 的作用，并参与神经信号传导作用。一旦海兔受物理化学因素影响后，其神经连索区间存在着差异多肽 与蛋白质，这些蛋白质可能是海兔对环境因素变化所产生的应激效应过程中参与了应激反应。研究这 些差异多肽与蛋白质，将有助于理解中枢神经系统与它紧贴的周边肌肉组织之间的信号传递和行为可 塑性等生理功能。显然，在神经连索中寻找参与信号传导、执行生理功能和应激相关的蛋白质与多肽具 有重要的科学意义。 本实验采用双向凝胶电泳技术分离NLCS胸膜神经节至体后背部肌肉神经连索的蛋白质组，并用 2实验部分 2．1仪器与试剂 2007-07．12收稿；2007—11-07接受 本文系国家自然科学基金(No和福建省创新团队培养计划资助项目 ·E·mail：hqhua,19@mU．edu．蜘 万方数据万方数据 578 分析化学 第36卷 5～8；胰蛋白酶(Promega BR