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不同温度对细胞骨架的影响 【摘要】：细胞骨架是维持细胞生命活动非常重要的结构成分,狭义上主要是指细胞质骨架,其装配和解聚受酸碱度、温度和钙离子浓度等多种因素的影响。本文使用显示细胞骨架最常用的考马斯亮蓝染色法初步探讨了酸碱度和温度对细胞骨架的影响程度。试验结果表明,不适当的酸碱度和温度都会导致细胞骨架的解聚,光镜下呈现不同程度的云雾状和空泡状,云雾状多出现在酸碱处理组,而空泡状多出现在温度处理组。【作者单位】： 生命科学学院; 【关键词】： 细胞骨架 考马斯亮蓝 酸碱度 温度  二、实验原理 细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。狭义的细胞骨架指细胞质骨架，包括微丝、微管、中间纤维。一些细胞骨架系统的装配和去装配在时间和空间上是高度有序的，在体外，它们在温度因素的作用下，可进行装配或去装配过程。 考马斯亮蓝法显示细胞骨架1、?蛋白质的细胞化学： （1）蛋白质是细胞中重要的结构和功能成分，某些染料能与蛋白质的氨基酸残基结合，产生颜色反应，借以对蛋白质进行显示。这种对蛋白质直接染色的细胞化学方法并不多，特异性也不强。 （2）目前，应用最广泛的方法是利用免疫标记技术对蛋白质进行特异性显示，通过荧光标记细胞骨架成分的单克隆抗体对细胞骨架蛋白进行显示。 2、?细胞中的细胞骨架成分： （1）、细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构。其概念具有狭义和广义之分：狭义的细胞骨架是指细胞质骨架根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同包括微丝、微管和中间纤维；广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。核骨架、核纤层与中间纤维在结构上相互连接，贯穿于细胞核和细胞质的网架体系。 （2）、细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。实验用品 () 材料 洋葱器材 显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、PH 计 (3) 试剂 1. 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS) 0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液（PB，PH7.3） 50ml 0.15mol/L NaCl 双蒸馏水加至1000ml 2. PB 0.2mol/L Na2HPO4 77ml 0.2mol/L NaH2PO4 23ml 3. M-缓冲液 咪唑(PH 6.7) 50mmol/L KCl 50mmol/L MgC12 0.5mmol/L EGTA 1mmol/L EDTA 0.1mmol/L 巯基乙醇 1mmol/L 甘油 4mmol/L 用1mol/L HCl 调pH 至7.2。 4. 1%的Triton X-100/M-缓冲液 5. 0.2%考马斯亮蓝R250 染液 甲醇 46.5ml 冰醋酸 7ml 蒸馏水 46.5ml 6. 3%戊二醛- PB 溶液（PH7.3） 四：实验方案 步骤一： 温度处理方法 撕取洋葱鳞茎上的鳞叶,置于4 个培养皿中,分别在- 18 ℃冰箱、4 ℃冰箱、50 ℃培养箱和20 ℃(对照) 中处理1h。 步骤二： 细胞骨架的制片与观察 首先将洋葱片放入装有pH 值6.8 磷酸缓冲液的小玻璃瓶中，使其下沉；然后吸去磷酸缓冲液，用1%Triton X- 100 处理25min（抽提骨架以外的蛋白质）；吸去Triton