生物仪器分析复习资料.docVIP

生物样品的预制备 从生物大分子的预制备过程来说，一般包括材料选择和预处理（如洁净、切片、风干等）、破碎、提取纯化、浓缩、结晶、干燥和贮藏保存等步骤，应该根据各个步骤的具体要求和生物样品来源（动物、植物或微生物培养物）的不同而采用不同的方法和技术设备。 超声波细胞破碎机是利用超声波在液体中产生的空化效应，可用于各种动物、植物细胞，细菌及组织的破碎和匀浆化。 固相萃取用于样品分析前的净化或富集。 固相萃取的一般步骤是：液态或溶解后的固态样品倒入活化过的固体萃取柱，然后利用抽真空、加压或离心方式使样品进入固定相；然后再用另一种溶剂把目的组分从固定相上洗脱下来。 固相萃取（SPE）的萃取过程包括四个基本步骤，即固定相活化、样品上柱、淋洗和待测组分洗脱。 旋转浓缩仪是在维持低于大气压的压力下将较大体积的液态样品进行蒸发从而有效地大大缩小样品体积的装置，也是分离工作中的必备设备之一。它特别适用于预分离的组分不耐较高温度的热敏性或高黏度样品、抽提溶剂是水一类不易挥发的大容积抽提液的浓缩，例如色素抽提液、糖类的乙醇抽提液的浓缩等。 利用强大的离心力讲物理性质（如质量、浮力、沉降系数等）不同的悬浮液内微粒进行分离、浓缩的技术称为离心技术。离心技术特别适用于溶液量较小或沉淀黏稠的生物样品的分离。 离心机的主要参数：1、相对离心力 当离心机转头以一定的角速度ω旋转，对于旋转半径为r的任何颗粒所受到的向外离心力F可表示为：F=mω2r习惯上F常以相对离心力（RCF）的大小来衡量，指在离心时作用于颗粒的离心力相当于重力的倍数，即 RCF=mω2r/mg=ω2r/g式中，g为重力加速度（约等于980cm/s2）。 2、沉降系数 澄江系数指单位离心力作用下颗粒的沉降速度，用Svedberg（简称S）表示，量纲为s（秒）。1S=10-13s。 3、沉降速度 沉降速度指在离心作用下颗粒在单位时间内运动的距离。 9、离心过程中决定颗粒沉降速度的是该颗粒的半径和有效密度。由于沉降速度随颗粒半径的平方值的变化而变化，可见颗粒大小是“影响更大于”颗粒密度的因素。因此，具有相似大小或密度的颗粒可有完全不同的沉降速度，从而得以彼此分离。 10、通常根据用途将离心机分为制备性离心机和分析性离心机两类。也可根据离心机的转速分为低速（6000r/min）、高速(6000~25000r/min)和超高速(30000r/min)离心机。 11、离心机使用注意事项：1、根据分离对象和有关资料，选择合适的离心转速（或离心力）和离心时间，在安全速度内运行。 2、样品必须保持平衡。 3、转头通常较重，在更换时必须非常谨慎，轻取轻放，避免碰撞或掉落。离心前必须确认是否正确组装、上紧盖子。 12、技术路线 可能用到的设备 细胞破碎 匀浆器、超声波破碎器、高速组织捣碎机 分离提取 萃取器、各式离心机 纯化精制 离心机、层析柱、电泳仪 浓缩 旋转蒸发浓缩仪 结晶、干燥 真空干燥机、冻干机 冷藏冻存 超低温冰箱 上述所示的是分离蛋白质或酶的一个前处理步骤中，对应于拟采取的技术路线可能用到的仪器或设备的例子。 细胞生物学新型研究技术与设备 1、激光扫描共聚焦显微镜系统利用紫外光或可见光激光激发荧光探针而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，具有快速、实时、定性、定量、定位地进行分析测量的功能，尤其是可进行活细胞的无损伤测定，并可利用强大的计算机图像处理技术将一定厚度范围内的细胞或结构的虚拟光学切片进行三维重建工作。 2、LSCM共聚焦的工作原理：1、在LSCM系统中采用了点光源，由点光源发出的激光光束通过光源针孔；2、经过二色镜折射至物镜后，聚焦于样品的焦平面上；3、从样品表面上反射回来的光信号反向并透过二色镜刚好会聚在共聚焦检测孔上，被放置在该位置上的光电倍增器所接受，这样就采集到了从样品的聚焦点上获得的该点的信息；4、在焦平面上作X或Y轴向的逐点逐线的移动扫描所获得的信息，经计算机储存、处理，即可获得该XY平面的二维图像。LSCM工作时可以根据研究需要选择不同的扫描方式，既可以沿着Z轴扫描得到一系列XY平面，也可以沿着Y轴扫描得到一系列XZ平面。借助于计算机的图像处理专用软件，可以将这些平面图像“堆积”起来，成为立体的三维图像。这就是所谓的三维重建的基本原理。 3、典型的LSCM系统构成由激光光源、扫描头