环介导等温扩增技术检测蚊体内间日疟原虫子孢子的研究.pdfVIP

·158· Sehisto J Control 中国血吸虫病防治杂志2010年第22卷第2期Chin 2010，V01．22，No．2 [文章编号]1005-6661(2010)02-0158-06 ·论著· 环介导等温扩增技术检测 蚊体内问日疟原虫子孢子的研究 朱韩武1，曹俊1，周华云1，李菊林1，朱国鼎1，顾亚萍1，王伟明1，刘耀宝1，陶志勇2，高琪h [摘要] 目的建立一种简便、快速和高敏感度的蚊体内间日疟原虫检测的环介导等温扩增方法(LAMP)。方法针对 间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因种属特异性保守区域6个位点设计2对引物，以感染性按蚊、阴性按蚊、恶性疟原虫 x x x 止加1．3×106、1．3x105、1．3×104、1．3103、1．3102、1．3101、1．3×100拷贝混合后为模板进行LAMP反应，观察其 进行LAMP反应，观察批量检测的敏感性。再用此方法与镜检解剖、巢式PCR同时检测同批次人工感染的67只按蚊，评 价其应用价值。结果此法检测感染性按蚊阳性，对照组均为阴性；检测不同比例稀释的间日疟原虫CSP基因质粒DNA x 与按蚊DNA混合物，最低可检测1．3102拷贝的间日疟原虫CSP基因质粒DNA与按蚊DNA的混合物；检测不同比例 感染按蚊与阴性按蚊DNA混合样本，最低可检测出在128个按蚊中有1个感染按蚊的混合样本；用此法检测67只同批 内间日疟原虫简便、快速、敏感性高，具有广阔的应用前景。 [关键词]环介导等温扩增技术；间日疟原虫；子孢子；蚊媒 [中图分类号】 R382．31【文献标识码】 A Plasmodiumvivax Detectionof usingloop—me- sporozoites—carryingmosquitoes diatedisothermal amplification(LAMP) zhi— Zhu Ju．1inl，Zhu Wei—ruin91，LiuYao—ba01，Tao Hart．伽1，CaoJunl，ZhouHua—yunl，Li C,uo-din91，GuYa-pin91，Wang yon92，GaoQil‘ 1 lastituteParasitic on ParasiticDiseasePreventionand Jiangsu of LaboratoryTechnologyfor Control，Ministryof Diseases，Key Provincial orl,Molecular onParasitic Health，JiangsuKeyLaboratory BiologyofParasites，^angsuProvincial研SubjectDiseases， Wuxi 214064，China；2DepartmentofParasitology，SchoolofMedicine，SudwuUniversity，China 宰Corresponding