MLPA技术在3种遗传性疾病基因诊断中应用.pdfVIP

·136· ．论著． MLPA技术在3种遗传性疾病 基因诊断中的应用 姚如恩 余永国 耿娟 郑昭碌 王剑 沈永年应大明 傅启华 【摘要】 目的评估多重连接探针扩增技术(MLPA)在脊髓性肌肉萎缩症(SMA)、DiGeorge综 合征和先天性肾上腺皮质增生症(CAH)基因诊断中的应用价值。方法采集2010年2月至2011年 2月期间，上海儿童医学中心门诊21例确诊为SMA、DiGeorge综合征和CAH患者及家系成员(3例 SMA先证者和家系成员6人、DiGeorge综合征4例、CAH患者8例)外周血并抽提基因组DNA。通过 探针和靶序列DNA杂交、连接、PCR扩增，产物经毛细管电泳分离及GeneMarker@分析软件收集分析 数据，建立MLPA技术，检测SMA、DiGeorge综合征和CAH患者及携带者致病基因拷贝数，并通过传 统PCR酶切法和染色体芯片分析技术验证部分MLPA检测结果。结果用MLPA技术检测3个 SMA家系3例先证者SMNI基因第7和8号外显子均为0拷贝(纯合缺失)，其父母均为该区域杂合 缺失携带者，用传统酶切分析SMN基因扩增产物证实MLPA结果准确可靠；4例DiGeorge综合征患 者中，3例患者22q11．2区域为0．5拷贝左右(杂合缺失)，缺失基因均包含Tbxl等，用染色体芯片技 术分析其中1例患者全基因组拷贝数变异为22q11．2区域的1．3Mb缺失，结果与MLPA检出的拷贝 数变异相符；8例CAH患者中，6例存在2l一羟化酶的编码基因(CYP21A2)及相关基因CAB和 CYP21A1 P的不同程度杂合缺失。结论 MLPA技术作为传统检测拷贝数变异技术的补充，可有效提 高相对定量检测SMA、DiGeorge综合征和CAH患者及携带者致病基因拷贝数变异。r乒华检验医学 瓣，2013，36：136—141) 【关键词】 核酸扩增技术；脊髓性，肌萎缩；DiGeorge综合征；肾上腺皮质增生，先天性 ofMLPA inmolecular ofthreeinheriteddiseasesYAO Applicationtechnology diagnosis Ru—en， YU Yong—guo，GENGJuan，ZHENGZhao-jing，WANGJian，SHENYong—nian，Y1NGDa—ming，FU Qi—hucL 7 of ChildrenSMedical DepartmentLaboratoryMedicine，Shanghai Center，ShanghaiJiaotongUniversity School ofMedicine，Shanghai200127，China author：FU CorrespondingQi—hua，Emaif：qihuafu@126．corn Toevaluate a 【Abstract】Objective multiplexligation—dependentprobeamplification(MLPA)as senetic methodtodetect number and diagnostic variants(CNVs)in copy SMA，DiGeorgesyndrome CAH．MethodsGenomicDNAwasextractedfrom bloodof21 andtheir members peripheral patients family receivedin Children’SMedicalCentre