利用tol2转座子构建斑马鱼心脏组织特异表达转基因载体及其表达分析.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, February 25; 26(2): 230−236 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2010 CJB, All rights reserved. 生物技术与方法 利用Tol2 转座子构建斑马鱼心脏组织特异表达转基因 载体及其表达分析 陈婷芳，罗娜，谢华平，吴秀山，邓云 湖南师范大学生命科学学院 心脏发育研究中心，长沙 410081 摘 要: 为了制备用于在斑马鱼心脏中特异表达目的基因的转基因载体，通过分子克隆的方法对能够在斑马鱼心脏中 特异表达EGFP 报告基因的 Tol2 载体进行了改造，在原有的 CMLC2 启动子与EGFP 编码区之间插入带有多克隆位点 的IRES 序列，获得 pTol2- CMLC2-IRES-EGFP 转基因表达载体，该载体可以实现在同一个启动子 CMLC2 的驱动下分 别同时表达目的基因和 EGFP ；为了验证该表达载体的有效性，进一步在 CMLC2 启动子与 IRES 序列之间插入 DsRed-Monome 编码区，利用得到的pTol2- CMLC2-RED-IRES-EGFP 转基因载体显微注射到斑马鱼单细胞期胚胎中进行 表达分析，结果表明外源目的基因 DsRed-Monome 和报告基因EGFP 均能以相同的表达模式在斑马鱼心脏组织中特异 表达。pTol2- CMLC2-IRES-EGFP 转基因表达载体的成功构建对于建立心脏发育候选基因的斑马鱼转基因实验模型具有 重要意义。 关键词: Tol2 转座子，斑马鱼，转基因，心脏特异表达 Construction and expression analysis of the zebrafish heart-specific transgenetic vector based on Tol2 transposable element Tingfang Chen, Na Luo, Huaping Xie, Xiushan Wu, and Yun Deng College of Life Sciences, Hunan Normal University, Changsha 410081, China Abstract: In an effort to generate a desired expression construct for making heart-specific expression transgenic zebrafish, a Tol2 plasmid, which can drive EGFP reporter gene specifically expressed in the heart, was modified using subcloning technology. An IRES fragment bearing multiple cloning site (MCS) was amplified directly from pIRES2-EGFP plasmid and was inserted between the CMLC2 promoter and EGFP fragment of the pDestTol2CG vector. This recombinant expression plasmid pTol2-CMLC2-IRES-EGFP can drive any interested gene specifically expressed in the zebrafish heart along with EGFP reporter gene. To test the effectiveness of this new expression plasmid, we constructed pTol2-CMLC2-RED-IRES-EGFP plasmid by inse