剌槐幼苗中L一亮氨酸氨基转移酶的提纯和特性.PDFVIP

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2017-11-07 发布于江苏
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剌槐幼苗中L一亮氨酸氨基转移酶的提纯和特性

南京林业大学学报 VoI. H r\o. 第14 吉、第 1 !t丁 JOURNAL OF NANJ1NG Ma lch 1 9 9 0 1990年 3 月 FORESTRY UNIVERS lTY 剌槐幼苗中L一亮氨酸氨基转移酶的提纯和特性陆究辉 (非本学系〉摘要刺槐幼苗中的L--亮氨酸氮基转移酶(EC2.ß. 1.6 ， LAT)经热处理、硫酸按沉淀、Sephadex G-100和DEAE-纤维素柱层析被提纯61倍，聚丙烯眈胶凝胶电泳 o 显示单一的带。这种酶的分子量为 7 x 10 最适pH为9.0 ，最适温度为60 c ，它对 L-亮氨酸的km为2.5mM，对 α-隅戊二酸的km为3.5mMJ 全酶的吸收光谱在 230 和280nm显示两个主峰，在320和425nm显示两个小峰，透析后320牙口425nm的小峰基本消失;这种脱辅基酶蛋白无活力，但与100μM磷酸IltG 哆隆保温1 ，， 4h便可恢复活力80，， 100 %，这表示刺槐LAT的辅基是磷酸 Ptt 哆瞪:一些叛基试剂和底物类 2 2 2\ 2\ 似物(二竣酸〉能抑制这种酶的活力，除C02 十外， Mg Mn + 、 Cu + 、 Hg 3 3 2 4 3 Fe +和A1 +对酶活力都无抑制 1 X 10- MHg +和 1 x 10- M金属萤合剂乙二胶四乙酸 (EDTA) 对酶无抑制作用暗示，束IJ 槐 LAT 没有对活力所需要的硫氢基和金属离子。关键饲刺槐;L-亮氨酸;氨基转移酶刺槐 (Robiη ia pseudoacacia) 是豆科树木，种子宫含蛋白质，萌发时进行着强烈的蛋白质和氨基酸代谢。酸基转移作用是氨基酸代谢的关键性反应。 L 一完氨酸氨基转移酶是枝链氨基酸如L 一亮氨酸、异亮氨酸和赖氨酸合成与分解代谢的主要酶。 LAT在微生物和动物中已有一些研究U-u o 但在树木中LAT的提纯和特性尚无报道。因此，术文对刺槐幼苗中LAT的提纯和特性进行了研究，为调节树木氨基酸代谢和生长提供参考。材料与方法一、种子萌发生长 0 0 h 刺槐种子先用75 C热水浸也30min，然后在冷水中浸种48 ，再转移到培养皿内，在25 Ç 收稿日期 1989-06-18 。 - 16 一吃ìJ~条伴下发芽，发芽)lJ 生长1-5天进行酶的t~.!lJ 0 二、酶的提取 4--5天龄幼苗510g，用水