荷人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的特异性近红外荧光探针-中国显微图像网.pdfVIP

荷人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的特异性近红外荧光 探针成像1 申宝忠，王可铮，李伟华，王凯，黄涛，王知非，李任飞，王丹 哈尔滨医科大学附属第四医院影像科， 哈尔滨（150001 ） E-mail ：shenbzh@ 摘 要 ：利用近红外分子探针 EGF-Cy5.5 对人类乳腺癌 MDA-MB-231 和 MDA-MB-435S 原位移植瘤模型进行活体成像，探讨光学分子成像在特异性示踪肿 瘤生长方面的价值。建立人类乳腺癌原位移植瘤裸鼠模型，用流式细胞学方法检测 MDA-MB-231 和 MDA-MB-435S 细胞膜表皮生长因子受体（EGFR ）的表达量，化 学法合成探针，鼠尾静脉注射探针后用近红外光学成像仪（eXplore Optix System ） 进行活体动态肿瘤成像，切取肿块离体成像后进行 HE 染色。用激光共聚焦显微镜 观察探针与肿瘤细胞的体外结合与阻断。MDA-MB-231 胞膜 EGFR 表达率 41.96% ， MDA-MB-435S 为 0.12% ；EGF-Cy5.5 分子探针合成率为 68% ；注射荧光探针 24h 后在MDA-MB-231 模型的肿瘤区信号明显高于对侧正常组织及MDA-MB-435S 肿瘤 区，EGFR 单克隆抗体 C225 阻断后肿瘤荧光减弱。体外实验证明，MDA-MB-231 细 胞与探针的结合能力强于 MDA-MB-435S 细胞，细胞与探针的结合可以被 C225 阻断。 EGF-Cy5.5 能和肿瘤细胞膜 EGFR 特异性结合，进行动态无创的肿瘤近红外线光学 分子成像，为研究人类乳腺癌的发生、发展及转移提供了新的思路和方法。 关键词：分子成像；乳腺癌; 近红外荧光探针；表皮生长因子受体 0. 引言 近红外光线(NIR 650–900 nm)的特点是穿透力强、生物自发荧光最弱，水和血红蛋白的 吸收系数小 [1] 。近红外荧光探针与肿瘤细胞的靶点特异性结合，直接反映与肿瘤形成和进 展相关的分子水平的改变（如膜受体），因此在国外已成为光学分子影像学研究的热点，而 国内的相关研究刚刚起步。本试验利用EGF-Cy5.5 对人类乳腺癌细胞的EGFR 进行特异性 结合，对乳腺癌裸鼠移植瘤模型进行活体光学分子成像研究。 1. 材料与方法 1.1 材料 人类乳腺癌MDA-MB-231 和MDA-MB-435S 细胞由中国医学科学院基础医学细胞库 提供。细胞培养液L-15 培养基购于Invitrogen 公司；胎牛血清购于Gibco 公司。4～6 周龄 雌性BALB/c nu －nu 裸小鼠购于北京维通力华实验动物有限责任公司提供。近红外荧光染 料Cy5.5-NHS 购自于美国Amersham Biosciences 公司；人类表皮生长重组体(hr-EGF)购自 于美国Sigma Chemical 公司；C225 (cetuximab)购于德国Merck Systems 公司；鼠抗人EGFR 单克隆抗体和同型对照抗体鼠IgG2b k 购自美国BD 公司。 1.2 细胞的培养及荷瘤鼠模型的建立 MDA-MB-231 和 MDA-MB-435S 细胞培养于含10％胎牛血清的L-15 培养基，37 ℃、 1本课题受到国家自然科学基金 (项目编号 ，教育部博士点基金（项目编号20050226016 ）, 黑龙 江省杰出青年基金（项目编号JC2005-04 ）的资助。 - 1 - 5%CO 孵箱中孵育。将对数生长期乳腺癌细胞消化后制成单细胞悬液，0.2 ml，5×106 细胞/ 2 鼠，注射于裸鼠胸部乳腺皮下脂肪垫，每2d 观察一次，游标卡尺测量肿瘤直径，待肿瘤直 径达20~25mm