变性高效液相色谱检测沙门氏菌空肠弯曲菌和肠出血-生物技术通报.pdfVIP

生物技术通报 年第 期 ·研究报告· BIOTECHNOLOG Y BULLETIN 2009 3 变性高效液相色谱检测沙门氏菌、空肠弯曲菌和 肠出血性大肠杆菌 徐君怡 曹际娟 郑秋月 刘淑艳 徐杨 （辽宁出入境检验检疫局，大连 116015） 摘 要： 应用多重PCR 反应（multiplex PCR ，mPCR）结合变性高效液相色谱（denaturing high-performance liquid chromatography，DHPLC）技术建立食品中沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 的快速检测方法。以编码 沙门氏菌的fim Y 基因、编码空肠弯曲菌的gyrA 基因和编码肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 的rfbE 基因为靶基因，选择3 对 引物，建立并优化了快速鉴别沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 的多重PCR 体系，扩增产物分别为 284、159 和499 bp ，并验证了该多重PCR 具有特异性。沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 标准菌株稀 释成不同梯度，做灵敏度检测。试验结果表明该方法有很好的特异性，且灵敏度高，检测限可达到：沙门氏菌1.5 CFU/ ml、 空肠弯曲菌15 CFU/ ml、肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 15 CFU/ ml。在随机采集的226 份冷冻鸡肉类样品中，检出了7 份 样品为沙门氏菌阳性、10 份为空肠弯曲菌阳性、1 份为肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 阳性。研究建立的多重PCR -DHPLC 方法可特异、灵敏地实现对沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 的快速检测。 关键词： 沙门氏菌 空肠弯曲菌 肠出血性大肠杆菌O157 ：H7 变性高效液相色谱 Identification of Salmonella ，Campylobacter jejuni and Enterohemorrhagic E.coli by Denaturing High-performance Liquid Chromatography Xu Junyi Cao Jijuan Zheng Qiuyue Liu Shuyan Xu Yang （Liaoning Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of China ，Dalian 116015） Abstract ： A new molecular technique for the analysis of Salmonella ，Campylobacter jejuni and enterohemorrhagic E.coli based on the separation of PCR -amplified target fragments by denaturing high-performance liquid chromatography （DHPLC）was reported. A multiplex PCR （mPCR）assay was developed by using 3 sets of primers that specifically amplify segments of the fim Y，gyrA and rfbE genes，the PCR Produc