溶解氧对γ-聚谷氨酸合成的影响-生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（３）：４２４８ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 溶解氧对 聚谷氨酸合成的影响 γ １ １ １ １ １，２ 李小鑫 　高明昊 　张苗苗 　刘晓晨 　乔长晟 （１天津科技大学工业发酵微生物教育部重点实验室　天津　３００４５７　２天津北洋百川生物技术有限公司　天津　３００４５７） 摘要　在５Ｌ发酵罐上研究了溶解氧（ＤＯ）对地衣芽孢杆菌分批发酵生产 聚谷氨酸（ＰＧＡ）的 γ γ 影响并考察在８ｈ、３２ｈ、５６ｈ时，葡萄糖激酶、６磷酸葡萄糖脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶 和谷氨酸脱氢酶的活性及对应时间点上 ＰＧＡ的生产速率。通过溶解氧电极和搅拌转速的串联 γ 控制发酵过程中溶解氧水平，发现高溶解氧（６０％）水平和低溶解氧（１０％）水平均不能高效积累 γＰＧＡ。６磷酸葡萄糖脱氢酶活性的提高对产物的积累有抑制作用，葡萄糖激酶和谷氨酸脱氢酶 的酶活提高对产物积累有促进作用，过高的丙酮酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶的活性在一定程度 上可以促进菌体生长但不利于产物的积累。此外，通过对三种不同ＤＯ水平下 ＰＧＡ生物合成 γ 途径中相关代谢流量的计算表明，在ｐＨ６．５的条件下，对于谷氨酸依赖型生产菌株，提高外源谷 氨酸利用率可以促进 ＰＧＡ的生物合成。 γ 关键词　 聚谷氨酸　溶解氧　代谢通量　关键酶活性 γ 中图分类号　Ｑ３３ 　　 聚谷氨酸（ＰＧＡ）是一种天然存在的，由Ｌ型和 发酵过程中菌体的生长情况和发酵过程的好坏。溶解 γ γ Ｄ型谷氨酸两种单体通过 酰胺键连接起来的均聚氨 氧在发酵过程中受通气量、转速、发酵液性质、罐压等 γ 基酸，其结构式见图： 诸多因素影响。控制好溶解氧，摸索清楚菌体在发酵 过程中好氧情况，适当增加或是降低溶解氧会让发酵 产量大大提升。 　　近１０年来，基因组尺度代谢网络模型发展十分迅 速，构建方法和工具也逐渐成熟，已经有很多高质量的 代谢网络模型发表。代谢通量平衡研究是一个对细胞 　　 ＰＧＡ具有极佳的成膜性、成纤维性、阻氧性、可 γ 功能代谢有价值的工具［７］。在枯草芽孢杆菌 ＣＧＭＣＣ 塑性、黏结性、保湿性和可生物可降解等许多独特的物 ０８３３的碳代谢途径中提出了该菌对葡萄糖和谷氨酸的 理和化学特性，无毒、无害，对人体无任何不良反 ［８］ ［１４］ 利用情况 。在目前的工作中，我们主要通过测量地 应 。然而，不同立体化学组成的 ＰＧＡ有着不同的 γ