DNA的粗提取与鉴定(精华版)东师.ppt

课题1 DNA的粗提取与鉴定;⑴ DNA的溶解性;DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。;实验原理;（一）实验材料的选取;实验材料和用具;（一）实验材料的选取;1、胀破细胞，得DNA溶液 （1） 鸡血细胞液5-10ml，加入蒸馏水20ml，使血细胞加速破裂，过滤，取其滤液。;动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可;2、植物细胞 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜;经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。; ;静置降沉的鸡血细胞液;加入NaCl 使浓度为2mol/L DNA为溶解状态;过滤,取纱布上 含DNA的粘稠物;预冷的酒精溶液（体积分数为95%）的作用主要有四：;1 2;能用甲基绿代替二苯胺对DNA进行鉴定吗？;实验操作小结： 制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心 ↓ 破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同一方向快速 通方向搅拌 ↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。 溶解核内DNA………… 加入NaCl至2mol/L，同一方向缓慢搅拌 ↓;DNA析出……………… 加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，再溶解到2mol/L溶液中 ↓→除去细胞质中的大部分物质。 DNA初步纯化………… 与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物 ↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。 DNA鉴定……………… 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色;请同学们解释提取DNA的实验操作中主要的步骤的目的。;(1) 哺乳动物成熟的红细胞不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白和制备细胞膜的理想材料。 (2) 实验过程中两次用到蒸馏水;DNA粗提取注意问题：;讨论：;2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和0.14 mol／L对DNA有何影响?;3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色;5．DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些物质溶于酒精溶液。下图为“DNA的粗提取”实验的相关操作步骤，其操作目的错误的是（ ） A．①是洗涤红细胞、去除红细胞表面的??质 B．②是稀释NaCl溶液至0.14mol/L，析出DNA C．③是选用2mol/LNaCl溶液，溶解粘稠物中的DNA D．④是纯化DNA，去除溶于95%酒精的杂质;6．向溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水，在这个过程中DNA和杂质蛋白质的溶解度变化情况分别是(　　) A．减小；减小　　　　　 B．增大；增大 C．先减小后增大；增大 D．减小；增大;