柑橘无标记转基因转化体系的建立-湖南农业大学学报欢迎您！.pdfVIP

第36 卷第6 期 湖南农业大学学报( 自然科学版) Vol .36 No. 6 20 10 年 12 月 Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences) Dec ．20 10 DOI:10.3724/SP.J.1238.2010.00649 柑橘无标记转基因转化体系的建立 1,2,3 1,2,3 1,2,3 1 4 1,2,3* 李琳洁 ，杨莉 ，李芳 ，谢玉明，曾柏全，邓子牛 ( 1.湖南农业大学 园艺园林学院，湖南 长沙 410128 ；2.湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室，湖南 长沙 410128 ；3.国家柑橘改良中心 长沙分中心，湖南 长沙 410128 ；4.中南林业科技大学 生命科学与技术学院，湖 南 长沙410004) 摘 要：采用 1 个结合化学诱导系统XVE 和位点专一性重组系统Cre/LoxP 的标记基因剔除载体，对柑橘进行 无标记转基因研究 ．此载体可通过β-雌二醇诱导表达系统控制重组酶系统Cre 基因表达来剔除标记基因npt Ⅱ．将 侵染后糖橙节间茎段接种在(MS+3 mg/L BA)培养基上 ，共培养(暗培养)3 d 后转移到筛选培养基（MS+75 mg/L Kan+500 mg/L Cef ）中．在筛选抗性再生芽后，切下带1~2 mm 外植体的抗性芽，转移至含有β-雌二醇的化学诱 导培养基( MS+3 mg/L BA+ 500 mg/L 头孢霉素+2 μmol/L β-雌二醇)上诱导，15 d 后用荧光显微镜观察，成功观测 到绿色荧光 ．进行试管嫁接，30 d 后，提取接穗基因组DNA 进行PCR 扩增，检测到DNA 的切除现象 ．研究结 果表明此化学诱导切除标记基因系统应用在柑橘上是可行的 ． 关 键 词 ：柑橘 ；无标记转基因体系；化学诱导 ；标记基因；β-雌二醇 中图分类号：Q943.2 文献标志码：A 文章编号：1007-1032(2010)06-0649-04 Marker-free transgenic system of Citrus 1,2,3 1,2,3 1,2,3 1 4 1,2,3* LI Lin-jie , YANG Li , LI Fang , XIE Yu-ming , ZENG Bo-quan , DENG Zi-niu (1.College of Horticulture and Landscape, HNAU, Changsha 410128, China; 2.Hunan Provincial Key Laboratory of Corp Germplasm Innovation and Utilizatio, Changsha 410128, China; 3.National Center for Citrus Improvement, Changsha 410128, China; 4. Central South University of Forestry Technology, Changsha 410004, China） Abstract ：The marker-free transgenic Citrus was investigated by combining application of a chemica