脂肪酶表面展示技术.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（９）：９７～１０２ 脂肪酶表面展示技术 刘文山　闫云君 （华中科技大学生命科学与技术学院　武汉　４３００７４） 摘要　脂肪酶是一种广泛应用的水解酶类。脂肪酶的表面展示技术不仅是脂肪酶蛋白质工程中 一种有效的高通量筛选方法，而且展示的脂肪酶与自由酶相比具备更高的温度稳定性、有机溶剂 稳定性等优点，其作为全细胞催化剂与传统的固定化脂肪酶相比也具备诸多优点。脂肪酶表面 展示的宿主包括噬菌体、细菌以及酵母等，将分别介绍这三种宿主中脂肪酶表面展示的概况及其 作为高通量筛选和全细胞等方面的应用。 关键词　脂肪酶　表面展示技术　高通量筛选　全细胞催化剂 中图分类号　Ｑ８１９ 　　脂肪酶（Ｌｉｐａｓｅ，ＥＣ３．１．１．３）是一种长链三酰基甘 １　脂肪酶的噬菌体表面展示 油酯水解酶，它除了可以催化三酰基甘油酯水解，还可 以催化酯化、转酯、氨解反应。这些反应通常具有底物 　　噬菌体展示系统是最早研究得比较成熟的展示系 专一性、区域选择性和对应选择性。因而脂肪酶被广 统，虽然噬菌体展示系统从丝状噬菌体发展到Ｔ４、Ｔ７ 泛地应用于洗涤剂、油脂与食品加工、有机合成、皮革 和 噬菌体等表面展示系统，能展示的蛋白越来越大， λ 与造纸工业等领域。然而并非所有的脂肪酶都适应特 其应用也日渐广泛，但主要还是集中在对突变文库等 定的工业生产条件，因此利用脂肪酶的固定化、蛋白质 的筛选研究上，噬菌体展示技术用于展示脂肪酶近几 工程、表面展示等技术提高脂肪酶的热稳定性、有机溶 年才有报道。 剂耐受性等以适应不同的应用要求成为近年来脂肪酶 ［３］ 　　最早的报道是Ｄａｎｉｅｌｓｅｎ等 利用丝状噬菌体外壳 研究的热点。 蛋白ｐ 为载体蛋白（Ｃａｒｒｉｅｒｓ）将约３２ｋＤａ的脂肪酶 Ⅲ 　　１９８５年ＧｅｏｒｇｅＰ．Ｓｍｉｔｈ等首次将外源抗原决定簇 （Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓｌａｎｕｇｉｎｏｓｅｌｉｐａｓｅ，２９１ａａ）展示在丝状噬菌 与丝状噬菌体的次要外壳蛋白（ｐＩＩＩ）融合并展示在外 ［４，５］ 体表面。随后，Ｄｒｏｇｅ等 曾尝试在噬菌体表面展示 壳表面，此后又证明展示的抗原决定簇能被相应抗体 ［１，２］ 铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）和产碱假单胞 所识别，从而创立了噬菌体表面展示技术 。在此基 菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）脂肪酶，但是没有获得成 础上，细菌和酵母表面展示技术也日益成熟。表面展 功。之后他们利用同样的丝状噬菌体展示系统成功展 示技术能将外源蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌 示了没有盖子结构域的小分子枯草杆菌脂肪酶 ＬｉｐＡ 体、细菌或酵母的表面，保持相对独立的空间构象和原 （Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ１６８ｌｉｐａｓｅＡ，１８１ａａ），以对硝基苯酚辛 有的生物活