玉米漆酶zmlac5基因拟南芥遗转转化-安徽农业大学.pdfVIP

安徽农业大学学报, 2012, 39(4): 533-539 Journal of Anhui Agricultural University 网络出版时间：2012-7-4 18:27:40 [URL] /kcms/detail/34.1162.S1827.039.html 玉米漆酶ZmLac5 基因拟南芥遗转转化 1,2 2 1 1* 1, 2* 莫乔程 ，赵永平 ，朱苏文 ，程备久 ，谢传晓 (1. 安徽农业大学生命科学学院, 合肥 230036 ；2. 中国农业科学院作物科学研究所，北京 100081) 摘 要：旨在模式生物拟南芥中获得玉米漆酶ZmLac5 基因过表达转化体，以研究该基因功能。分离玉米自交 系掖478 根部总 RNA ，反转录PCR 法获得玉米漆酶基因ZmLac5 全长，测序与序列分析表明，ZmLac5 cDNA 的开 放阅读框为 1 758 bp，编码一个由 586 个氨基酸组成的蛋白质。同源性比对和进化树分析显示该基因与高粱 Sb03g039570.1 和谷子 Si000813m 在进化上亲缘关系较近。采用 In-Fusion 试剂盒构建了过表达载体 pCUB- Ubi::ZmLac5，通过电击法将过表达载体导入根癌农杆菌 LBA4404 中，并成功转化拟南芥(Columbia ecotype) ， 获得 PCR 阳性 T1 代植株 62 株，转化率为 1.28%，T2 代阳性植株 60 株。本研究为基于模式生物体过表达分析该 基因生物学功能奠定了分析基础。 关键词：玉米；漆酶；ZmLac5 ；过表达；遗传转化 中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1672−352X (2012)04−0533−07 Transformation of ZmLac5 gene in Arabidopsis thaliana 1,2 2 1 1 1,2 MO Qiao-cheng , ZHAO Yong-ping , ZHU Su-wen , CHENG Bei-jiu , XIE Chuan-xiao (1. School of Life Sciences, Anhui Agricultural University,Hefei, 230036; 2. Institute of Crop Scienes, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081) Abstract: The objective of this study is to get the Arabidopsis transformants of maize ZmLac5 and eventu- ally it may be used into analyzing the gene function. Total root RNA from Ye478, a maize inbred line, was ex- tracted and purified to perform reverse transcription PCR and the ZmLac5 full length cDNA was cloned. Se- quencing analysis revealed that ZmLac5 encodes a protein containing 586 amino acid residues from a 1 758 bp open read