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变质米饭中霉菌的分离提纯 【摘要】 粮食是最易被霉菌污染的一种食品原料，霉菌污染会造成粮食的霉烂变质，其产生的毒素会造成人畜中毒，而发霉变质的米饭中就有许多细菌，我们要从众多的细菌中提取我们实验所需要的一种霉菌，所以我们就要进行霉菌的分离与提纯。培养基是人工配制的适合微生物繁殖或积累代谢产物的营养物质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢物。本实验用的培养基是查氏培养基，它是培养霉菌用的，用以提供氮源、碳源及能源等。把从变质的霉菌中提取的较纯的霉菌接种到培养基中培养，进而再分离，最后提纯得到纯净单一的霉菌。然后将得到的霉菌做一些相对应的染色实验，再次验证霉菌的性质。 【关键字】 米饭 分离 提纯 鉴定 霉菌(mold)是能引起物质霉腐的丝状真菌(Mycelial fungus)的统称，它不是分类学上的名词，而是真菌(Fungus)的一部分。凡是生长在培养基上成绒毛状或棉絮状菌丝体的菌，都称之为真菌。霉菌分别属于植物分类学的菌类植物的子囊菌纲(一、comycetes),藻状菌纲(Phycomcetes)和半知菌纲(Fungi imperfecti)。 霉菌在自然界中分布极为广泛，土壤、空气、水和生物体内外到处都有，与人们日常生活关系密切。霉菌除应用于传统的酿酒、制酱和制作其它发酵食品外，在农业、纺织、食品、医药和皮革等方面都起着极为重要的作用。但是，不少霉菌(黄曲霉、灰绿曲霉、绿青霉等)能在食品、谷物上生长并产生真菌毒素。粮食中常常生长的主要是寄生性和腐生性霉菌，其种类约有200多种。 发霉变质的米饭中有许多细菌，要想混杂的细菌群体中获得只含有某一或某一株细菌，就得进行微生物的分离与纯化。常用方法有：简单单细胞挑取法及平板分离法。本实验运用平板分离法。它是根据所分离的微生物的生长条件加入某种物质或选择某一温度、酸碱度等，进行培养，淘汰一些不需要的微生物，从而得到所需的微生物。 1.实验材料和方法 1.1材料与仪器 1.1.1变质的米饭 1.1.2培养基：查氏培养基 水 500ml NaNO3 2g K2HPO4 1g KCl 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g PH 6.8 蔗糖 30g 琼脂 20g 1.1.3实验器材 培养皿 三角瓶 试管 酒精灯 接种环 试管架 天平 灭菌锅 培养箱 100ml量筒 10ml量筒 400ml烧杯 震荡器等 1.2方法： 1.2.1实验前准备 米饭处理：取一些米饭，滴上数滴葡萄糖液，再放到潮湿阴凉避风的地方，使其发霉变质，备用。 器皿清洗：用洗衣粉把培养皿洗干净，灭菌备用 器皿消毒灭菌：需要灭菌物品用牛皮纸包好后高压蒸汽灭菌 试剂配制：乳酸石炭酸棉蓝染色液 1.2.2培养基配制 按照所示配方将培养基配置完成后，用棉塞赛好，包上牛皮纸，放在高压放在高压灭菌锅中，于121℃~125℃下灭菌30分钟后取出。 灭完菌后趁热倒平板：将其均匀倒入12个培养皿和3支试管中。其方法是右手持盛培养基的锥形瓶，置火焰旁边，左手拿培养皿并松动锥形瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出。锥形瓶口在火焰上灭菌，然后在左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养皿约20ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养皿均匀分布，平置于桌面上。（3支试管则是倒斜面）待冷凝后，置37℃培养箱中培养24h，若无杂菌生长，即可使用。 1.2.3无菌水的制备：瓶中放入90 ml.水，另取5支试管各放入9 ml.水，绑好后经高压蒸汽灭菌制备成无菌水。 1.2.4霉菌稀释液的制备：准确称取编制的米饭10g，放入装有90 ml.无菌水并放有小玻璃珠的250 ml.