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广玉兰rDNA ITS区序列分析 潘云飞 (盐城师范学院生命科学与技术学院07（19）班，江苏盐城，224002) 指导老师 ：刘忠权 【摘要】 目的 分析广玉兰核糖体DNA(rDNA) ITS序列及其特点和规律，为我国盐海滩涂种植业的开发及生态建设提供理论指导。方法 在TagDNA聚合酶作用下，以P1和P2为引物、广玉兰核糖体DNA为模板、四种dNTP为底物，PCR扩增技术来扩增广玉兰核糖体DNA ITS序列并用相关软件作序列分析。结果 测得广玉兰rDNA ITS 及5.8S rDNA 完全序列，18S 和28S rDNA 部分序列长度为648bp，其中ITS1为227bp，(g+c)的含量为57.3%;TS2为223bp，(g+c)的含量为61.0%。与其他藜科植物比对，广玉兰rDNA ITS序列上有135个变异位点。 结论 核糖体DNA ITS序列可作为研究较低等级如属间、种间甚至居群间的系统关系的依据。 【关键词】 广玉兰 核糖体基因组 ITS序列 引言 广玉兰（学名：magnolia grandiflora linn）。 由于开花很大，形似荷花，固又称“荷花玉兰”。广玉兰原产于美洲，所以又有人称它为“洋玉兰”。可入药，也可做道路绿化。荷花玉兰树姿雄伟壮丽，叶大绿荫浓花似荷花芳香馥郁，为美化树种，耐烟抗风对二氧化硫等有毒气体有较强抗性，净化空气保护环境广玉兰（guǎng yù lán）常绿大乔木，高20-30m。树皮淡褐色或灰色，呈薄鳞片状开裂。枝与芽有铁锈色细毛。叶长椭圆形，互生；叶柄长1.5-4cm，背面有褐色短柔毛；托叶与叶柄分离，无托叶；叶革质，叶片椭圆形或倒卵状长圆形，长10-20cm，宽4-10cm，先端钝或渐尖，基部楔形，上面深绿色，有光泽，下面淡绿色，有锈色细毛，侧脉8-9对。花芳香，白色，呈杯状，直径15-20cm，开时形如荷花；花梗精壮具茸毛；花被9-12，倒卵形，厚肉质；雄蕊多数，长约2cm，花丝扁平，紫色，花药向内，药隔伸出成短尖头；雌蕊群椭圆形，密被长绒毛，心皮卵形，长1-1.5cm，花柱呈卷曲状。聚合果圆柱状长圆形或卵形，密被褐色或灰黄色绒毛，果先端具长喙。种子椭圆形或卵形，侧扁，长约1.4cm，宽约6mm。花期5-6月，果期10月。广玉兰生长喜光，幼时稍耐阴，是弱阴性树种。喜温暖湿润气候，有一定的抗寒能力。适生于高燥、肥沃、湿润与排水良好的微酸性或中性土壤，在碱性土种植时易发生黄化，忌积水和排水不良。对烟尘及二氧化硫气体有较强的抗性，病虫害少。根系深广，抗风力强，生长速度中等。特别是播种苗树干挺拔，树势雄伟，适应性强。本品中酚性成分还具有抗菌和抗真菌作用。树皮中所含厚朴酚（magnolol）尚具有抗溃疡病作用，5-200mg/kg对大鼠水浸应激溃疡有显着的预防作用。5.8S、18S、28S 编码区以及一些间隔区组成(ITS)。ITS (internal t ranscribed spacer) 区位于18S和28S 基因之间，中部被5.8S 一分为二，即ITS1区与ITS2 区。5.8S、18S、28S进化速率慢，常用于探讨科级和科级以上等级的系统发育问题。而间隔区如ITS 区进化速率较编码区快，一般用于研究较低等级如属间、种间甚至居群间的系统关系。 1 材料与方法 1.1 植物材料 采取新鲜的广玉兰,于-80℃冷冻半天,从而有利于DNA的提取。 1.2 主要仪器与试剂 HH-S型二列四孔数显水浴锅、移液器、Eppendorf离心管、ppendorf Centrifuge高速冷冻离心机、WH-962 ROUER DRUM、恒温干燥器、GeneAmp PCR system 9700、WB微波炉、水平板电泳槽、电泳仪、紫外分析仪dNTPs)、MgCl2、Buffer缓冲液、引物（P1,P2）、琼脂糖、氯仿、试剂盒SDS溶液、C液等。 1.3 广玉兰rDNA提取与纯化 将-80℃处理的广玉兰叶茎研磨成浆，将研磨的浆置于Ependorf管中，并分别加入分离缓冲液和20%的SDS溶液；置于56℃水浴1-2小时；加入等体积的氯仿溶液,轻轻颠倒混匀15min，室温下8000r Pmin高速冷冻离心10mi；将离心后的上清液移至另一干净的离心管中,在加入等体积的氯仿，颠倒混匀15min，8000rPmin高速离心10min；弃上清液，加入70%的乙醇洗涤沉淀8000rpmin离心5min；弃上清液，放干燥处烘干（一天时间）；取样本100ul，加入400 ulC液，混匀；将液体吸入内套管中，离心2min，弃去外套管中液体，内套管中加入500 ul洗液，离心1min，再重复此过程一次；取出内套，弃去外套管中液体,仍然套回内套管，不加洗液，离心1min ；将内套管取出放到新的Eppendorf管中，