大豆猝死综合症病原菌的PCR检测技术优化及其应用.pdfVIP

真菌及真菌病害 25 大豆猝死综合症病原菌的PCR检测技术优化及真．I蜩 and ofPCRdetection forSuddenDeath Optimizationapplication techniques of Syndromepathogensoybean 喻锦秀1，2吴品珊2朱水芳1·2高必达1。 (1湖南农业大学生物安全科技学院，长沙410128；2中国检验检疫科学研究院动植物检疫研 究所，北京100029) death of syndrome 摘要：大豆猝死综合症(sudden soybean，SDS)是由Fusarium tucumaniae引起的大豆真菌病害．本试验从检疫角度入手，在已有研究的基础上，对其分子检测技术进行改 进，建立适合口岸应用的检验检疫方法。采用PCNB选择性培养基对8份从各口岸采集的土样进行稀释培养， 对照标准菌株的菌落形态进行初步鉴定。同时，在ITS2区设计了一对特异引物FVS／A，仅扩增8个F 对引物可以鉴别SDS病原菌北美种，从而使检测方法更加快速简单． 关键词：大豆猝死综合症；土壤分离；检测 death 大豆猝死综合症(suddensyndrome 由镰刀菌引起的土传病害，是目前国际上十分关注的“热门”病害，也是我国极为关注的、即 将列入新修订的“进境植物检疫危险性病虫杂草名录”的检疫性有害生物。 SDS病原菌的命名一直存有争议【2~4】。因为菜豆根腐病菌Fusarium phaseoli(原名 Fusarium．soIani solani 将SDS病原菌定名为Fusarium solani tucwnaniae，同时将E virguliforme和南美种Fusarium f．sp．phaseoli提升为Ephaseoli solani的研究比较多，但是 (Burkh．)t61。国外关于区分SDS病原菌与其他非SDS病原菌的E 没有涉及到与E 年，吴品珊等采用Southern 并且可以鉴定到两个不同的种19]。随后，本实验从翻译延长因子1．a基因上找到一对特异引物， 采用等位基因特异性PCR结合双重PCR的方法将SDS病原菌与E spp．区分开。本试验在前面研究的基础上，进一步优化PCR检测技术，降低成本，提高准确 度，建立适合口岸应用的快速可靠的分子检测技术。 1．材料与方法 ‘通讯作者：高必达．教授。博士生导师，从事分子病毒学研究． 26 中国植物病理学会2006年学术年会论文集 1．1材料 1．1．1供试菌株 8株F virguliforme，5株Etucumamiea和2株E phaseoli来自美国阿肯色大学植物病 理系大豆实验室，灭菌土壤中保存，大豆疫霉菌(Phytophthora sp．)由本实验室分离保存，其他6株镰刀菌由大连民族学院吕国忠教授提供。 NO．Lat．inname Source Host 1．1．2供试土样 用以检测的土壤采集自上海、连云港等沿海口岸的进口大豆船只，这些进口大豆主要来 自美国、巴西和阿根廷等大豆猝死综合症多发国家。采集包装袋上粘的土块和大豆中混杂的 士粒，分别装