IndoxylSulfate诱导腹膜间皮细胞转分化的试验研究-中华细胞与.PDF

( ) 2017 6 7 3 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), June 2017,Vol.7, No.3 152 中华细胞与干细胞杂志 电子版 年 月第 卷第 期 · · ·论著· Indoxyl Sulfate 诱导腹膜间皮细胞转分化的 实验研究 王强 俞国庆 黄雅清 傅云泉 陈鑫 庄永泽 【摘要】 目的 硫酸吲哚酚（IS）刺激永生化人腹膜间皮细胞株（HMrSV5 ）后，研究细胞 β1 β1 是否发生上皮细胞- 间充质转分化（EMT ），同时探索转化生长因子 （TGF- ）可能在其中的 作用。方法 体外培养HMrSV5，传代后，随机将人腹膜间皮细胞株分成以3 组：对照组：加入 4 .2 5 ﹪腹膜透析液与培养液共培养；I S 处理组：分别用含2 50 µm ol/ LI S 、500 µm ol/ LI S 、 1 000 µm ol/LI S 浓度的培养液与4 .2 5 ﹪腹膜透析液共培养；TGF -β1 受体抑制剂组：用含 2 µmol/L LY364947+IS 的培养液与4 .25 ﹪腹膜透析液共培养。分别在培养0、4 、12 、24 、48 和 α 72 h 时间下，采用细胞免疫荧光法观察细胞形态变化，Western Blot 法研究细胞 平滑肌肌动蛋 α 白（-SMA ）的表达规律，48 h 时用ELISA 法测定纤维连接蛋白（FN ），层粘连蛋白（LN5 ）两种基 质蛋白的分泌情况。结果 （1）免疫荧光法显示：与正常细胞比较，IS 处理组细胞由典型的铺 路样鹅卵石状，逐渐变细变长，呈梭形改变；而TGF-β1 受体抑制剂组细胞形态变化不明显，不 α 如IS 处理组；（2 ）Western Blot 法检测结果显示：与对照组比较，IS 处理组 -SMA 的表达水 vs P 平明显增加，48 h 时1 000 µmol/LIS 表达最明显（39.929 ±2.610 0.996 ±0.001； 0.01），差 异有统计学意义；与IS 处理组比较，TGF-β1 受体抑制剂组的表达则明显减少，其中48 h 时抑制 vs P 明显（7.4 18 ±3.075 39.929 ±2.610， 0.01），差异有统计学意义；（3 ）ELISA 法结果显示：与 vs P 对照组比较，IS 处理组基质蛋白FN （1.368 ±0.040 1.094 ±0.036， 0.01）、LN5 （1.031±0.085 vs P β1 0.860 ±0.063， 0.01）的表达均上调，差异有统计学意义；与IS 处理组比较，TGF- 受体抑制 vs P vs P 剂组FN （0.925 ±0.15 1.368 ±0.040， 0.01）、LN5 （0.795 ±0.426 1.031±0