《动物细胞工程》(新人教版选修)(经典动画).pptVIP

动物细胞培养过程中几个重要的概念 （1）细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 原代培养 (primary culture) 定义：指将要培养的动物细胞取出后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬液，再将该悬液放入培养瓶中培养。 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 材料1: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？ 思考： （1）请概括单克隆抗体的概念 （2）根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，思考实验过程与原理？ （3）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？制备过程为何要经过两次筛选？ 1.概括单克隆抗体的概念 单克隆抗体的制备 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理： 实验材料：小白鼠 实验器材：培养皿、针筒等等。 实验过程：？ 3、单克隆抗体的应用 * 植物组织培养 植物体细胞杂交 回顾： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 动物细胞工程 (一).动物细胞培养 (三).动物细胞融合 (四).单克隆抗体 (二).细胞核、胚胎移植 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬液 培养瓶中培养 部分细胞“癌变”，无限传代 动物细胞培养不能 最终培养成动物体 50代细胞 原代培养 传代培养 细胞贴壁 剥离、分瓶 细胞株 细胞 细胞系 动物细胞培养过程： 增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养 去掉组织间 蛋白 （2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 动物细胞培养特点： 贴壁生长、接触抑制： 过程：从动物机体中取出组织 ? 剪碎 ? 加胰蛋白酶? 细胞游离 ? 制成细胞悬液 ? 将细胞接种到培养瓶内 ? 培养（1--2天换一次培养液）? 细胞贴壁生长 ? 长成单层细胞 传代培养 (subculture) 细胞株： 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。 细胞系： 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 细胞悬浮液 培养瓶中培养 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 知识点小结：各个新名词之间的联系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 动物细胞培养条件 保证细胞顺利的生长增殖 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 （4）用于检测有毒物质 （3）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （5）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 （2）作为基因工程的受体细胞 获得细胞 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 促生长因子 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 6、植物细胞和动物细胞培养的比较 卵细胞 C母绵羊子宫 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 胚胎移植 早期胚胎 多莉羊 分娩 卵裂 融合后的卵细胞 细胞拆合技术 妊娠 多莉羊的培育过程 细胞核移植 人-鼠(想像图) 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂交细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用 途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振 荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后