《生物技术实践》复习.pptxVIP

微生物的分离和培养 酶的研究与应用 DNA和蛋白质技术;一、微生物的培养与分离;㈠ 微生物的培养：;制备牛肉膏蛋白胨固体培养基;2.灭菌与消毒方法及对象;3.接种;平板划线操作;五区划线法;⑵　稀释涂布平板法;②涂布平板操作：;4. 培养——恒温培养箱;菌落的观察;二、某种微生物数量的测定：;4.统计菌落数目：;稀释涂布平板法;四、利用微生物进行发酵来生产特定的产物;㈡腐乳的制作;１.实验原理;3.实验设计及操作;４. 课题成果评价;;1. 实验原理：;2. 操作步骤;;腌制条件的控制;３、亚硝酸盐含量的测定;泡菜亚硝酸盐含量（mg/kg）= 　　　 样品亚硝酸盐含量 　　　取样量（40ml滤液） 比色亚硝酸含量单位：1μg= 10-3mg 取样量：0.4×1/2×60/500×40/100 = 9.6×10-3kg;观察样品颜色的变化，并与标准显色液比较，找出与标准液最相近的颜色，记录对应的亚硝酸钠含量，并计算。每隔2天测一次，将结果记录下来。;解释数据：;果酒、果醋、腐乳、泡菜相关内容比较;微生物的培养与分离主要考查内容;二、酶的研究与应用;㈠果胶酶在果汁 生产中的作用;1.实验原理：;2. 实验设计——操作步骤：;３.观察并记录数据;4.结果分析与评价;㈡探讨加酶洗衣粉的洗涤效果;１. 原理：;３.实验设计　;４.结果分析与评价;㈢酵母细胞的固定化;1. 实验原理：;２. 固定化细胞技术;固定化细胞;酶固定的几种方式示意图;α－淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测;三、DNA和蛋白质技术;㈠　DNA的粗提取与鉴定;1.实验原理：;２. 实验设计：;3. 实验设计;DNA在酒精溶液中的溶解性;操作步骤;⑦　提纯DNA： 95％冷酒精＋滤液→静置２～３min→出现白色丝状物 ⑧鉴定DNA 2mol/LnaCl溶液５mL＋白色丝状的物＋４mL二苯胺溶液→沸水浴５min→出现蓝色反应 ⑨设置对照 2mol/LnaCl溶液５mL＋４mL二苯胺溶液→沸水浴５min→没有蓝色反应 ⑩观察实验结果： 实验组与对照组是否变蓝;（PCR体外扩增DNA技术） ;1. 实验原理：;脱氧核苷酸结构式;;;四种脱氧核苷酸(dNTP);２.实验操作;靶序列（目的基因）;靶序列;靶序列;靶序列;循环 次数;４. 结果分析与评价;扩增DNA含量的测定;PCR仪加热至93℃使模板DNA变性 降温至55℃复性使引???与模板DNA碱基互补 再升温至72℃J时，DNA沿着3’→5’复制延伸 在Taq聚合酶作用下进行 以四种脱氧核苷酸(dNTP) （N=ATCG）为原料, 以引物为复制的起点,合成新链。子链沿5’?3’方向聚合 重复改变反应温度,经变性、复性和延伸三个阶段为一个循环, 一般样品是经过30次循环, 使基因放大了数百万倍;