番鸭源新城疫病毒全基因组序列分析.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集 ·新城疫· 番鸭源新城疫病毒全基因组序列分析。 施少华1，黄瑜1#，崔尚金2，李曦2，程龙飞1，傅光华1 (1福建省农科院畜牧兽医研究所福州3500132中国农科院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001) [摘 获得了番鸭源新城疫病毒FPI／02株全基因组序列。经测序结果表明，NDVFPI／02株与鹅源浙江株ZJl和上海株SF02周源 率分别为99．O％和99．1％，与鸡源NDV参考株Hert／33和LaSota的同源率分别为88．0％和83．3％。 +新城疫(Newcastledisease，ND)是由新城疫病宿主菌DH5a由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 Disease 毒(NewcastleVirus，NDV)引起的一种禽 动物疫病诊断中心保存；常用工具酶及试剂盒由 类急性高度接触性传染病[1]。NDV给全球造成巨大 的经济损失，也是危害最大的禽类病毒病，可能比其 TIANGEN公司等提供，其它均为国内分析纯。 它动物病毒造成的损失都大，对发达国家养禽业，不 1．2方法 仅因暴发ND导致巨大的损失，而且控制本病也是 1．2．1病毒的纯化与RNA的提取番鸭源NDV d FPI／02感染的9--11 mL， 一种持续性损失[2]。NDV为有囊膜的单股负链不分 SPF鸡胚的尿囊液20 8 000 节段RNA病毒，编码NP、P、M、F、HN和L蛋白。g、4℃离心10min去除杂质，收集上清液， 141000 除上述蛋白外，NDV基因组还通过RNA编辑编码 g、4℃离心3h，沉淀物用适当的TE液重 2种非结构蛋白，V和W蛋白。自本世纪初以来，国 内外愈来愈多的报道显示水禽不再仅是NDV的自 pL尿囊液的RNA用9弘LDEPC水溶解。 然宿主和病毒贮存库，现已成为NDV自然感染发 病、死亡的易感禽类[3]。从水禽中分离到的NDV与 以往的NDV流行毒株相比，无论是从血凝谱等生 AF431744)，应用Oligo6．24软件设计引物。 物学特性方面，还是在致病相关基因的同源性方面 1．2．3基因组5’末端引物根据已测定的FPI／02 都出现了较大的改变[4]。我们于2002年自福建莆田株部分序列设计反转录引物和反向套式引物。 1．2．3．1 发病番鸭的脏器中分离鉴定出1株NDVt51。为了从 5’磷酸化反转录引物： 分子水平上探讨该病毒株的演化，本研究对其基因 组序列进行测定，这将为对我国NDV开展分子流 向套式引物： 行病学和跨种间致病研究提供科学资料，也为今后 研制有效的NDV疫苗奠定基础。 1材料与方法 1．1材料 duck／ 1．2．4 Reverse 番鸭源新城疫病毒Muscovy RT—PCR反转录按M—MLV China(Fujian)／FPI／02，简称FPI／02，由福建省农 业科学院畜牧兽医研究所禽病研究室分离、鉴定和 RNA 9弘L，加入200pmol／uL的随机引物l弘L， d 保存；9～11SPF鸡胚由中国农业科学院哈尔滨 70C水浴变性5min后立即放入冰水混合物中冰浴 RT5× 兽医研究所实验动物中心提供)pMD18一T克隆载 5min，然后加入以下成分：M—MLV