兔膝关节骨组织石蜡切片的制备中国显微图像网.PDF

兔膝关节骨组织石蜡切片的制备1 1 2 3 1 2 2 戚亦萍 ，吴明媛 ，王明海 ，李会贤 ，张忠辉 ，韩伟 1 浙江理工大学生命科学院新元医学与生物研究所，杭州 (310018) 2 上海交通大学药学院再生医药学实验室，上海 (200240) 3 上海市第五人民医院骨科，上海 (200240) E-mail: weihan@ 摘 要：目的：探索一种简单、快速的制作兔膝关节骨组织石蜡切片的方法，观察关节软骨 和骨组织微观结构，为制备高质量骨组织石蜡切片和组织病理学研究提供实验基础。方法： 在兔一侧膝关节的股骨内侧髁关节面制造直径3 mm 深度4 mm 的全层关节软骨缺损。术后 4 周，分离股骨髁，经过10%中性甲醛固定和混合酸脱钙后制备骨组织石蜡切片，并行苏木 精-伊红（HE ）和番红- 固绿染色。结果：正常侧，透明软骨细胞规则排列、层次清晰，潮线 和软骨下骨清晰可辨；造模侧，损伤填充区细胞表现为软骨样细胞特征。结论：该法制备的 骨组织切片，周期短、标本平坦完整，软骨和骨组织结构分明、细胞和基质染色清晰，是对 传统方法的有效改良。 关键词：兔；膝关节；骨组织；石蜡切片 中图分类号：R361+.2 1. 引 言 骨组织是一种坚硬的结缔组织，含有大量钙盐沉淀。其制片过程首先需经脱钙处理, 溶 解钙盐, 这也是骨组织等钙化组织切片不同于其它组织之处。且骨组织切片的制作，所需时 间较长，更易发生骨组织结构改变，碎片脱片，染色不佳等问题[1~2] 。本文利用新西兰兔建 立膝关节软骨损伤的动物模型，并取兔造模损伤处的股骨髁制备骨关节组织的石蜡切片。通 过在常规方法上的技术改进，成功摸索出一种简单、快速的骨组织石蜡切片制片方法。 2. 材料和方法 2.1 实验动物与试剂 2.1.1 实验动物 清洁级新西兰大白兔 6 只，2 月龄，体重 2.0-2.5 kg，雌雄不限（上海市松江县车墩实 验动物良种场提供）。 2.1.2 试剂与仪器 混合酸脱钙液的配置：88% 甲酸5 ml、浓盐酸 8.5 ml、六水氯化铝 7 g，混匀后蒸馏水 [3] 定容至 100 ml 。 切片石蜡、蜂蜡（国药集团化学试剂有限公司），苏木精染液、伊红染液（上海楷洋生 物技术有限公司），甲醛，二甲苯等。 LEICA 2500E 型切片机，85-2 数显恒温磁力搅拌器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限 公司），DPX-9082B 电热恒温培养箱（上海福玛实验设备有限公司），HH-4 恒温水浴锅（金 坛市新航仪器厂），光学显微镜（NIKON ），显微成像系统（OLYMPUS ）。 1本课题得到上海市科委基金项目（No.06d14001; 075407071 ）的资助 - 1 - 2.2 实验方法 2.2.1 动物模型的建立和取材 用 1.5%的戊巴比妥钠按 30 mg/kg 剂量行兔耳缘静脉麻醉，仰卧位固定。统一取兔左侧 后肢膝关节进行手术。将手术区剃毛，常规消毒，铺巾。在膝关节内侧纵行切口，约 3 cm 左右。从髌韧带内侧进入（不切断髌韧带），膝关节屈膝位。暴露出股骨髁关节面，在股骨 内侧髁关节面上，以直径为3 mm 电动骨钻转一孔，造成骨软骨损伤的全层软骨缺损。生理 [4] 盐水冲洗关节腔后，关闭切口。注射青霉素 40 万单位/天，抗炎 3 天 。 于术后 4 周处死兔子。以骨剪取下其双侧膝关节股骨远端部分，充分保留股骨髁造模部 分，但力求标本体积尽量小。去除周边软组织后，立刻投入 10％中性甲醛溶液中固定48 h 左右。脱钙处理前，对标本进行适当的清水浸泡和流水洗涤有利于减少甲醛的残留对后续制 片过程的影