五虎下山巴西蘑菇.docVIP

南台科技大學 生物科技系 學生專題 五虎下山、巴西蘑菇(奈米與非奈米)、山藥(奈米與非奈米)之生物活性探討 專題生：、蔡湘儀、指導教授：陳健祺摘要 本研究主要在探討五虎下山、巴西蘑菇(奈米與非奈米)、山藥(奈米與非奈米)水萃物及酒萃物對於乳癌細胞成長(MCF-7與MDA-MB-231)以及對造成癌細胞轉移之基質金屬蛋白酶(MMP-2與MMP-9)分泌的影響試驗。本試驗利用MTT assay檢測樣品的生物活性，結果發現MDA-MB-231細胞的存活率隨著五虎下山、巴西蘑菇(奈米與非奈米)水萃取液以及五虎下山酒萃取液隨著濃度的增加而有顯著地抑制腫瘤細胞增生的活性；MCF-7細胞的存活率隨著五虎下山水萃物濃度的增加有顯著下降的趨勢，但酒萃物對MCF-7細胞卻有促進細胞增生的作用；山藥(奈米與非奈米)對於乳癌細胞皆無明顯抑制。此外本實驗並利用流式細胞儀(FACS)來偵測樣品對乳癌細胞的凋亡(apoptosis)的影響，結果顯示樣品萃取物會造成乳癌細胞凋亡的現象且隨著濃度增加而提升。在腫瘤細胞轉移實驗中以樣品水萃物與酒萃物處理纖維囊腫細胞(HT-1080)後進行gelatin zymography assay，發現五虎下山水萃物與酒萃物有顯著地抑制HT-1080細胞分泌MMP-2與MMP-9的能力。由結果顯示，五虎下山可能具有抗腫瘤細胞生長的能力及抑制腫瘤細胞轉移的功效。本研究中也利用流氏細胞儀以DCFH-DA染劑進行抗氧化試驗，結果顯示山藥(奈米與非奈米）水萃取液皆具有抗氧化的功效。期望本研究的成果有利於台灣農業與保健食品發展的提升。 關鍵字：五虎下山、巴西蘑菇、山藥 壹、前言 ㄧ、癌症 行政院衛生署公布「2007年國人十大死因」統計，調查報告顯示行政院衛生署2007年的統計，乳癌排名臺灣地區女性主要癌症死亡原因第四名，每年因而死亡人數達1千餘人，死亡率占女性癌症死亡人數近10%。 惡性腫瘤生長迅速快且常常侵犯到周圍組織，使得與正常組織分界不清，當癌細胞體積增大後還會轉移到 其他組織及破壞被入侵的組織細胞，進而造成壓迫、潰爛、感染或其他等原因，導致出血、疼痛或器官功能喪失等症狀，因此腫瘤轉移可說是造成癌症病患死亡的主要原因之一(3)。過去的研究顯示，基質金屬蛋白酶（metallo- proteinases, MMPs）在惡性腫瘤轉移過程中扮演了重要的角色，基質金屬蛋白酶參與腫瘤轉移的數個步驟，包括侵入、轉移及血管新生，且會刺激分泌或活化生長因子使腫瘤成長。 三、抗氧化 人體過多的自由基會攻擊我們的細胞，導致蛋白質、細胞膜以及DNA發生變異，隨著這些損害的累積，組織和器官也在不斷退化，這也正是衰老的象徵。另外，受損傷的DNA累積後會造成某些慢性疾病的發生和退化性疾病的病因，包括心血管疾病。近年來位居十大死因之首的癌症，罪魁禍首便是自由基。研究顯示，抗氧化劑能有效清除體內過量自由基的物質，它能阻止氧化的發生，修復和防止氧化DNA損害，進而可以增強免疫系統功能和延緩衰老(4)。 貳、研究動機 根據調查結果顯示許多台灣民眾曾經吃過保健食品與中草藥，這些產品真正的功能性是有待證實，有鑑於此，我們選取一些市售產品與中草藥為實驗對象參、實驗架構 肆、材料與方法 一、細胞株與樣品來源 1.1實驗細胞株 MCF-7 (BCRC60436)、MDA-MB -231 (BCRC60425）、HT-1080 (BCRC 60037)，以及CHO-K1(BCRC60006)來自食品工業發展研究所。 1.2 樣品來源： 巴西磨菇(奈米與非奈米)、山藥(奈米與非奈米)由台茂奈米生化股份有限公司提供，五虎下山則購買於中藥店。 二、樣品萃取法 1 巴西蘑菇(奈米與非奈米)、山藥(奈米與非奈米)水萃物；五虎下山水萃物(萃法一) 1克樣品粉末加入10毫升去離子水，於121 oC下萃取10分鐘，冷卻後以4,000 ×g離心80分鐘，保留上清液做為實驗用材料。 2. 五虎下山水萃物(萃法二) 1克樣品粉末加入去離子水10毫升，於121 oC萃取15分鐘，冷卻後利用抽氣過濾，保留過濾後液體，再於121 oC萃取15分鐘，冷卻後以4,000 ×g離心30分鐘，保留上清液做為實驗用材料。 3. 樣品酒萃 1克樣品粉末加入95%酒精10毫升，搖晃24小時，以4,000 ×g離心30分鐘，保留上清液做為實驗用材料。 三、腫瘤細胞存活率測定（MTT assay） 乳癌細胞種植於96孔培養盤中含10%血清(FBS)培養基於37oC與5% CO2下培養24小時，加入樣品於細胞中培養24、48或72小時，培養後加入MTT，在37 oC下作用4小時後測定細胞的存活率。 四、細胞凋亡試驗 將MCF-7與MDA-MB-231細胞種植於培養皿中，以PBS清洗細胞後，加入含有血清培養基及樣品濃度，放置