嗜水气单胞菌fnr的表达纯化及酶活分析-应用与环境生物学报.pdfVIP

2013-12-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2013.01003 / Chin J Appl Environ Biol 2013 19 ( 6 ) : 1003-1007 应用与环境生物学报 ， * 嗜水气单胞菌FNR的表达、纯化及酶活分析 ** 张 凯 陈湖星 余金辉 严佳丽 刘德立 熊 丽 （华中师范大学生命科学学院 武汉 430079） + Ferredoxin-NADP reductases FNR 摘 要 铁氧还蛋白还原酶（ ， ）是一种在生物体的多种代谢中起着重要作用的黄素 . Aeromonas hydrophila XS91-4-1 FNR FNR 酶 为探讨嗜水气单胞菌（ ） 中 的功能和结构，通过克隆其 基因，构建重组表 达载体pET42a-fnr ，表达并分离纯化了具有活性的GST-FNR融合蛋白，根据米曼氏动力学测定了纯化蛋白对NADPH及 EDTA-Fe3+ 的酶活力，采用生物信息学方法对XS91-4-1 FNR蛋白序列进行系统学分析，并初步预测了该蛋白三维结构. Escherichia coli BL21 结果表明：重组质粒能够在宿主菌大肠杆菌（ ） 中获得高效可溶性表达，经镍柱亲和层析法可纯 化出电泳均一的目的蛋白，蛋白浓度为67.3 μg/mL；纯化蛋白对NADPH 的比活力为1.78 U/mg，对EDTA-Fe3+ 的比活力为 1.13 U/mg，比活力比粗酶分别提高了约29和22倍；生物信息学分析表明XS91-4-1 FNR分布在Bacterial-class FNR分支上 且具有与此类FNR相似的结构特点 . 上述结果显示嗜水气单胞菌 FNR具有与已报道的FNR相似的基本特性，并推测 其可能属于Bacterial-class FNR. 图6 表 1 参22 关键词 嗜水气单胞菌；铁氧还蛋白还原酶；可溶性表达；蛋白纯化；酶活；三维结构 CLC Q554 : Q936 Expression, Purification and Activity Determination of the Ferredoxin-NADP+ * Reductase in Aeromonas hydrophila XS91-4-1 ZHANG Kai, CHEN Huxing, YU Jinhui, YAN Jiali, LIU Deli XIONG Li** (College of Life Sciences, Central China Normal University, Wuhan 430079,