高等植物叶绿体基因组的转化.pdfVIP

植物生理学通讯 第4O卷 第3期，2004年6月 385 高等植物叶绿体基因组的转化 马三梅 王永飞 暨南大学生物工程学系，广州 510632 TheChloroplastGenomeTransformationinHigherPlants MA San—Mei．WANGYong—Fei DepartmentofBi0engineering，JinanUniversity，Guangzhou510632 提要 介绍了高等植物叶绿体基因组转化技术的原理和优点，外源基因导入叶绿体基因组的方法，外源基因与叶绿体基 因组的整合及其表达，常用的叶绿体基因组转化的筛选标记基因及其去除的研究进展。 关键词 叶绿体基因组转化；转基因植株；筛选标记基因 自从植物转基因技术诞生以来，采用农杆菌 要是基于 以下原理和方法：(1)利用了同源重组 介导法或基因枪等方法将外源基因导入细胞核一直 (homologousrecombination)机制，将外源基因定 是其主要的研究方向…。目前，细胞核转基因技 点整合到叶绿体基因组。在构建叶绿体表达载体 术已经相当成熟，并且己被广泛用于基础研究和 时，一般都在外源基因的两侧各连接一段叶绿体 应用研究2【】。然而，随着研究的不断深入，人们 的DNA序列，这两个片段称为同源重组片段或定 逐渐认识到细胞核转基因技术有其难以克服的缺 位片段(targetingfragment)。当载体导入叶绿体 点。例如由于细胞核基因组大，遗传背景复杂， 后，通过这两个片段与叶绿体基因组上的同源片 外源基因的整合位点和拷贝数难以人为控制，造 段发生重组，外源基因就可以整合到叶绿体基因 成外源基因表达效率低，在后代中表达不稳定， 组的特定位点8【J。(2)采用筛选标记基因实现叶绿体 以及容易出现 “基因沉默”(genesilence)和 “位 基因组的同质化(homogenization)。由于叶绿体基 置效应”(positioneffect)等现象[3]。另外由于核基 因组通常以高拷贝数存在，一般每个细胞有成千 因容易随花粉扩散，其所带来的生态安全性问 上万个叶绿体基因组，因而同时转化这么多基因 组几乎是不可能的，极易出现转化的和未转化的 题，正在全球范围内引起人们的关注…。为了克 叶绿体组成的异质体(heteroplasmon)，无法保证 服细胞核转基因技术的缺点，叶绿体基因组转化 获得的性状稳定遗传下去。因此叶绿体基因组转 己成为植物转基因技术的另外一个 目标。本文对 化所面临的一个关键问题就是去除未转化的基因组 高等植物叶绿体基因组转化技术的原理、优点和 和未转化的叶绿体。这个问题的解决是通过向叶 发展等进行介绍。 绿体表达载体中加入筛选标记基因，转化后进行 1叶绿体基因组转化的原理 抗性筛选 ，淘汰未转化的叶绿体，以实现转化叶 1988年，Boynton等 采用基因枪轰击法， 绿体基因组的同质化9【J。(3)采用叶绿体特异的启动 首次成功地将外源基因导入单细胞的莱茵衣藻 子和终止子实现外源基因的高效表达。为了使外 (Chlamydomonasreinbardii)中，并获得外源基因 稳定表达的转基因单细胞藻类。其后，Svab等6【】 源基因整合进叶绿体基因组后能够高效表达，在 将此项技术应用于高等植物，并获得烟草的叶绿