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(三)动物细胞融合的应用 二、单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体？ * * 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 植物体细胞杂交的意义： 打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。 一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动。 两个细胞正在融合 受精作用 (一)动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 （二）动物细胞融合的过程 与植物原生质体融合原理相同，方法类似。 杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的 为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。 动物细胞融合技术的发展简史 1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。 2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。 3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。 鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、 人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等 主要用于制备单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱导细胞融合 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较 什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体。 （一）获得抗体的传统方法 1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。 2、缺点： 产量低，纯度低，特异性差。 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念 用单个B淋巴细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。 2、怎样才能获得单克隆抗体？ 提示1：仅用细胞培养技术可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？ 利用B淋巴细胞产生抗体的功能。 利用肿瘤细胞无限增殖的特性。 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。 （二）单克隆抗体的制备 整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞 第二次筛选（克隆化培养和抗体检测）：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下，培养得到的细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。 杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体。 单克隆抗体的概念： 由单个杂交瘤细胞进行无性繁殖,也就是通过克隆，形成细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？ 就