动物细胞融合与单克隆抗体(用).pptVIP

回顾植物体细胞杂交过程 一、动物细胞融合 动物细胞融合 为什么灭活的病毒能作为诱导剂？(P52) 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 动物细胞融合 二、单克隆抗体 单克隆抗体 3、单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备过程 单克隆抗体的制备 单克隆抗体 *  动物细胞工程 动物细胞融合与单克隆抗体 第 三 课 时 融合的原生质体AB 再生细胞壁 杂种细胞AB 杂种植株 脱分化 愈伤组织 再分化 原生质体B 原生质体A 去 壁 人 工 诱 导 植物细胞A 植物细胞B 去 壁 也称细胞杂交。 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 杂交细胞：融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 1、概念： 细胞膜的流动性 4、原理： 3、诱导融合方法： 物理法: 化学法: 生物法： 灭活的病毒 离心、振动、电刺激 聚乙二醇（PEG） 2、过程： 思考与探究：P55T1 是否去细胞壁 生物法： 灭活的病毒 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 仙台病毒 紫外线 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 5、动物细胞融合技术的意义 打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； 广泛应用多个学科领域； 重要用途：制备单克隆抗体。 1.抗体是由何种细胞产生的？ ２.一个浆细胞能分泌多种抗体吗？ ３.简述获得抗体的传统途径？ ４.这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 传统血清抗体的制备： 方法：向动物体内反复注射某种抗原，然后从动物血清中分离所需要的抗体。 特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏 传统血清抗体的制备的缺陷： １、单克隆抗体概念 由单个B淋巴细胞（浆细胞）经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，由这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 　　那么，如何大量获得化学性质单一、特异性强的抗体？（即单克隆抗体）　 单克隆抗体的制备 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 杂种细胞 动物细胞培养技术 ２、设计思路： 动物细胞融合 单克隆抗体 既能产生专一的抗体，又能大量繁殖 单克隆抗体的制备 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 (杂交瘤细胞) 体内或体外 浆细胞 骨髓瘤细胞 融合 筛选 杂交瘤细胞 筛选 培养 所需杂交瘤细胞 培养 （体内、体外） 单抗 特异性强 灵敏度高 (两次筛选) 既能产生专一的抗体，又能大量繁殖 4、制备过程中： 1.注射抗原的目的是什么？ 2.诱导其融合的方法有哪些？ 3.融合后(两两融合)培养液中有几类细胞？ 4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点？ 5.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法? 5、单克隆抗体的应用： ①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合 ②用于 运载药物：制成“生物导弹” 治疗疾病：主要用于癌症治疗