肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Gna12表达的影响-天津中医药大学.PDFVIP

圆园12 10 月第 9 卷第5 期 天 津 中 医 药 Oct援 圆园12熏灾燥造援 9 晕燥援5 栽蚤葬灶躁蚤灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造 悦澡蚤灶藻泽藻 酝藻凿蚤糟蚤灶藻 469 肾消康对糖尿病大鼠肾组织 基因 Gna12 表达的影响* 乔 羽，解 颖，白玉宾， 兵，陈 飞，刘春红，柳成刚，常佳怡，高恩宇，韩洁茹，姜德友 （黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨 150040 ） 摘要：[ 目的] 观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响，探讨糖尿病肾病 （DN ）的发病机制，揭示中药复方肾消康防治DN 的作用机制，筛选药效作用靶点，为临床推广应用提供科学依据。[方 法] 本实验采用链脲佐菌素（STZ ）加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国 Affymetrix 公司的基因表达谱芯片、逆转录 合酶链反应法（RT原PCR ）等先进检测手段和方法，观察了多项指标，尤其 是通过 类分析寻找和DN 有重要相关性的基因，并进一步采用实时荧光定量RT-PCR 法做验证实验研究。[结果] 鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12（Gna 12），在糖尿病大鼠肾脏表达下调，肾消康中剂量组表达上调。[结论] 应用Affymetrix Rat2302.0 基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达，Gna 12 是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一， 并对该基因做荧光定量RT-PCR 测序分析。基因 能分析表明，在糖尿病状态下，Gna 12 表达下调，与糖尿病肾脏损 伤有重要相关性，而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Gna12 表达上调，可见肾消康对Gna12 基因表达具有良性调节 作用，其作用机制还有待于进一步研究。 关键词：肾消康；糖尿病；肾脏损伤；基因表达谱；鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12 中图分类号：R587.1 文献标识码：A 文章编号：1672-1519（2012）05-0469-06 糖尿病肾病（DN ）是糖尿病的一种严重的微血 （Gna12）表达的影响。 管并发症，其主要病理改变为肾小球肥大，基底膜 1 基因芯片实验 增厚，以及系膜区基质增加，导致弥漫性或结节性 1.1 主要试剂、药品和仪器 链脲佐菌素（STZ ）为 肾小球硬化。临床上早期表现为尿中排出微量白蛋 Calbiochem 公司产品；肾消康制成浸膏，由黑龙江中 白，继之出现临床蛋白尿，最后进展为慢性肾 能 医药大学附属第一医院制剂室制备，-20 益的冰箱 不全。近年来随着其发病率和病死率的提高，DN 严 保存，使用前加温至37 益。有关芯片检测试剂及仪器， 重地威胁着人类的健康，影响患者的生存质量，因此， 均为上海生物芯片有限公司制备，包括Affymetrix 对DN 的研究已成为世界性医学攻关课题。由于该 Genechip Scanner2.0、Affymetrix Fluidics Station450、 病的发病机制较复杂，临床尚无理想药物，而中医 Affymetrix Genechip Hybridization Oven640 等。 药在防治DN 方面颇具优势，为此笔者借助分子生物学 1.2 动物造模及分组 Wistar 大鼠120 只，雄性，体 研究方法，采用基因芯片技术，利用目前国际学术 质量 180~210 g（由哈尔滨医科大学实验中心提供）， 界公认的美国Affymetrix 公司生产的Rat2302.0 基 合格证号：分笼饲养，每笼饲养7 只，室 因表达谱芯片，首先进行差异基因筛选，然后进一 温（18依2 ）益，相对湿度50%耀60% ，通风良好，每日 步用实时荧光定量逆转录 合酶链反应法（RT-PCR） 光照12 h ，自由摄食、饮水。适应性喂养 1 周后，随 检测，寻找DN 相关基因，探讨DN 病变机制，筛选 机选取 10 只作为空白对照组，以普通饲料喂养，经 药效靶点，阐释中药复方肾消康治疗DN 的作用机