肿瘤相关巨噬细胞模型建立的试验研究-检验医学.PDFVIP

检验医学２０１４年９月第２９卷第９期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ９． ·８９７· 文章编号：１６７３８６４０（２０１４）０９０８９７０６　　中图分类号：Ｒ４４６．６１　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１４．０９．００７ 肿瘤相关巨噬细胞模型建立的实验研究 张国良，　刘 雯，　何怡青，　杨翠霞，　王文涓，　杜　艳，　高　锋 （上海交通大学附属第六人民医院中心实验室，上海２００２３３） 　　摘要：目的　建立肿瘤相关巨噬细胞（ＴＡＭ）的体外分化模型。方法　分离健康人外周血单核细胞进行体外 培养；经白细胞介素４（ＩＬ４）、白细胞介素 １３（ＩＬ１３）刺激后，利用流式细胞术检测细胞表面标志物 ＣＤ１４、 ＣＤ２０４、ＣＤ２０６的表达改变；利用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测单核细胞白细胞介素１０（ＩＬ１０）分泌量的改变； 继而将刺激后的单核细胞与肿瘤细胞共培养，采用Ｈｏｅｃｈｓｔ染色观察其对肿瘤细胞的杀伤情况。结果　经ＩＬ４ 和ＩＬ１３刺激后，单核细胞表面ＣＤ１４的表达率未发生明显变化，而ＣＤ２０４和ＣＤ２０６的表达显著增高，同时ＩＬ１０ 的分泌量也显著增高；与肿瘤细胞共培养结果显示，经ＩＬ４／ＩＬ１３刺激的单核细胞对肿瘤细胞的杀伤能力显著 下降。结论　ＩＬ４／ＩＬ１３可在体外诱导单核细胞呈现ＴＡＭ的表型和功能，适用于ＴＡＭ分化模型的建立，该模型 可应用于针对ＴＡＭ的相关研究。 关键词：；肿瘤相关巨噬细胞；白细胞介素４；白细胞介素１３；单核细胞；Ｍ２型巨噬细胞 　　Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｆｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｔｕｍｏｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｍｏｄｅｌ　ＺＨＡＮＧＧｕｏｌｉａｎｇ，ＬＩＵＹｉｗｅｎ， ＨＥＹｉｑｉｎｇ，ＹＡＮＧＣｕｉｘｉａ，ＷＡＮＧＷｅｎｊｕａｎ，ＤＵＹａｎ，ＧＡＯＦｅｎｇ．　（ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＳｉｘｔｈＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２３３，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｏｆｔｕｍｏｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ（ＴＡＭ）ｉｎｖｉｔｒｏ． Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｏｆｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏ．Ａｆｔｅｒｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｙｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ４（ＩＬ４）ａｎｄｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１３（ＩＬ１３），ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｈａｎｇｅｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌｅｍａｒｋｅｒｓｏｎｍｏｎｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＣＤ１４，ＣＤ２０４ａｎｄＣＤ２０６．Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１０（ＩＬ１０）ｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｕｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ａｆｔｅｒｃｏｃｕｌｔｕｒｉｎｇｗｉｔｈｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙＨｏｅｃｈｓｔｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＡｆｔｅｒｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｂｙＩＬ４ａｎｄＩＬ１３，ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄａｍａｒｋｅｄｌｙａｌｔｅｒｅｄｐｈｅｎｏｔｙｐｅｗｉｔｈｒｅｔａｉｎｅｄＣＤ１４，ｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＣＤ２０４ａｎｄＣＤ２０６ａｎｄｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇａｍｏｕｎｔｏｆｓｅｃｒｅｔｅｄＩＬ１０．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｗｈｅｎｃｏｃｕｌｔｕｒｉｎｇｗｉｔｈｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｔｙｏｆｍｏｎｏｃｙｔｅｓｏｎｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙＩＬ４／ＩＬ１３．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　ＩＬ