基因工程基本操作定稿.pptVIP

归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR扩增 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、Ca 2+处理 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 3.要检测目的基因是否成功的插入了受体DNA中，需要用基因探针，基因探针是指 A．用于检测疾病的医疗器械 B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子 C．合成一球蛋白的DNA D．合成苯丙羟化酶的DNA片段 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 * 基因工程的基本操作程序 陕西师大附中 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 1. 基因组文库 受体菌包含了某种生物所有的基因，该受体菌群体称为这种生物的基因组文库。 2. 部分基因文库 受体菌包含了一种生物部分基因，该受体菌群体称为这种生物的部分基因文库，如cDNA文库。 指满足人们需要，能编码蛋白质的结构基因。 3. 基因文库的构建 （1）基因组文库的构建 提取某生物 全部DNA 用适当 限制酶切割 许 多 DNA片段 与载体连接 导入受体菌群 该生物基 因组文库 （每个受体菌含有一段不同的DNA片段） （2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成 mRNA 逆转录酶 杂交双链 核酸酶H 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA 与载体连接 导入受体菌群 该生物 cDNA文库 PCR技术—聚合酶链式反应 原理： 前提： 条件： PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制 （二）利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术扩增过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成_______ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物 与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 双链DNA是在高温条件下解链为单链DNA的，因此整个过程不需要解旋酶。 （三）通过DNA合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 mRAN 核苷酸序列 基因DNA的核苷酸序列 目的 基因 推测 推测 合成 当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时，可采用此种方法。 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 二、基因表达载体的构建 1.下表关于基因工程中有关基因操作 的名词及对应的内容，正确的组合是 3. PCR技术扩增DNA,需要的条件是( ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体 A、①②③④　　　　B、②③④⑤　　　 C、①③④⑤　　 D、①②③⑥ 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 4.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B．有利于对目的基因是否导入进行检测 C．增加质粒分子的分子量 D．便于与外源基因连接 5.哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌 导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达 1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上 2.转化