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新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进-河北师范大学学报
3 1/ 2 / 河北师范大学学报/ / Vol. 31 No. 2
2007 3 JOURNALOFHEBEI NORMAL UNIVERSITY/ Natural Science Edition/ Ma r. 2007
新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进
1, 2 1 1 1 1 1
王 娜 , 关 鹏, 段相林 , 李 清, 常彦忠 , 石振华
( 1. , 050016; 2. , 050091)
:SD , ,
. 24 h SD ,,,0. 1g/ L
, .,
95 %. , .
:; ;
:Q 813. 11 :A : 1000-5854(2007) 02-0256-04
[ 1]
,
, , [ 2~ 3] .
, ; ,
; ;
[4~ 5]
. , . ,
.,
.
1
1. 1 实验动物和试剂
24 h SD 10~ 15 , DM M ( Invitrogen ) , () ,
(Gibco ) , Brdu(Sigma ) ,A-SA( Sigma ) , ABC (Sigma ) , DAB
() .
Ñ: DM M , 100 g/ L FBS, 1g/ L .
Ò : DM M , 0. 1mmol/ L Brdu, 1g/ L .
Ó: DM M .
1.2 方 法
1.2. 1
, , PBS , .
3 [ 6]
1mm , 1g/ L 37 e 10 min, ,
10 min, , Ñ.
, ..
[7]
1~ 2 mLÑ, , , 2 h .
, , ,
.2 Ò 2d[8~ 9] , . Ó,
.
* :2006 10 23; : 2006 12 19
:( 303158) ; ( B2002010)
: ( 1976 ), , , , , .
:( 1965 ), , , . - mail: shizhhtom@ 126. com
# 257 #
1.2. 2
1) .2, 12, 24, 30, 72 h (Leica-IM40)
.
2) . , .
3) .3, 6, 9, 12, 15 10
.
4) . (A-sarcomeric actin,A-SA)
.
2
2. 1 原代培养的心肌细胞形态学观察
, (1a) ; 2 h ,
, , ,
(1b) ; 12 h , ,
(1c) ; 24 h 50% , , 50~ 150 / min(1d) ; 30h
, 90 % , 80~ 130 / min( 1e) ; 72 h
, , ,
, (1f) . , , 1min ,
200 / min . 120 / min ,
[ 10]
. 3~ 15 d,
, .
1
2.2 心肌细胞活性测定
72h , , ,
. 1000 , 95 % . 6 , 97.57 %
(1) .
# 25 #
2. 3 原代培养的心肌细胞活力测定 1
1~ 2 d ,
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