小麦籽粒异淀粉酶聚合体的结构及酶学性质-数据分析与知识发现.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(6):1077-1084 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.06.001 小麦籽粒异淀粉酶聚合体的结构及酶学性质 1 2 3 4 4 4 赵法茂 , 齐 霞 , 张天英 , 李天骄 , 毕建杰 , 王宪泽 1 2 3 ( 泰山学院生物系，山东泰安 271021 ； 泰安市科学技术协会，山东泰安 271000 ； 山东省荣成市农业局，山东荣成 264300 ； 4 山东农业大学作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018) 摘要：【目的】阐明小麦淀粉去分支酶（Debranching enzyme, DBE）的结构和酶学特性，为品质改良提供理 论依据。【方法】以小麦品种糯麦2号为材料，利用硫酸铵分级沉淀、超滤、阴离子交换柱层析和葡聚糖凝胶层析 法对异淀粉酶（Isoamylase, ISA）同工酶聚合体进行分离纯化，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native） 和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）对ISA聚合体的结构和组成成分进行分析。【结果】小麦籽粒胚乳中异淀 粉酶（ISA）形成 2 种不同聚合体，即 ISA1 同源四聚体和由 4 个 ISA1 与 1 个 ISA2 组成的异源五聚体，分子量分 别约为320 kD和380 kD。ISA1同源四聚体的最适催化温度为30℃，40℃处理10 min后完全失去活性；ISA1/ISA2 异源五聚体的最适温度为35℃，50℃处理10 min后仍有50%的活性。纯化后的ISA1和ISA2进行Native检 测证明，ISA2 单独存在没有催化活性，将ISA2加入到ISA1中可检测到与ISA1/ISA2 异源聚合体相同的ISA活性。 【结论】小麦胚乳中存在2 种形式的ISA 多亚基聚合体；在40℃和50℃高温条件下，ISA1/ISA2异源聚合体的热 稳定性高于ISA1同源聚合体；ISA2可显著增强ISA1聚合体的酶活性，可能在支链淀粉合成中起关键作用。 关键词：小麦；淀粉去分支酶；异淀粉酶聚合体；热稳定性 The Constructure and Enzymatic Characterization of Isoamylase-Oligomer from Wheat Endosperm 1 2 3 4 4 4 ZHAO Fa-mao , QI Xia , ZHANG Tian-ying , LI Tian-jiao , BI Jian-jie , WANG Xian-ze 1 2 ( Department of Biology, Taishan College, Taian 271021, Shandong; Taian Association for Science and Technology, Taian 271000, Shandong; 3Agricultural Bureau of Rongcheng, Rongcheng 264300, Shandong ; 4State Key Laboratory of Crop Biology, Shandong