激素介导的兔股骨头缺血性坏死的细胞凋亡研究.pdfVIP

3口全目麓关节外科学术研讨套☆ 激素介导的兔股骨头缺血性坏死的细胞凋亡研究 大连大学附属中山医院骨科王本杰赵德伟 116001 necrosisofthefemoral 股骨头缺血性坏死(Avascular head，ANFH)的病因及发病 机制至今仍是困绕人们的一大医学难题，凋亡作为一种新的细胞死亡形式，为人们研究股 骨头缺血性坏死提供了一种全新的研究思路和方法。其与股骨头缺血性坏死发病关系方 面的-_些研究已初步揭示了细胞凋亡与股骨头缺血性坏死的密切联系． 本研究建立激素介导的兔股骨头缺血性坏死动物模型，通过对其进行形态学和分子 生物学检测来研究细胞凋亡在股骨头缺血性坏死的病理生理过程中可能发挥的作用． 材料与方法 一、实验动物 健康新西兰白兔48只(大连医科大学提供)，体重2．54-0．2公斤，雌雄不限．外观毛 色纯正，丰满均匀．随机分为实验组与对照组，每组24只． =、型制备与处理 以4mg／kg肌肉注射甲基强的松龙，每周一次．对照组注射等慧生理盐水．模型制 备完成后于第2-4，6，8，10，12周·每周2组各4只实验兔。行X线摄片后处死，取单侧股 骨头标本． 三、观察指标硬检测方法一+ 1．一般情况手术动物观察切口愈合情况，每周称体重1次·观察动物皮毛、活动情况。 模型制备完成后于第2，4，6·8，10，12周，每周每组取2只实验兔，摄x线后。分别处死并 取单侧股骨头标本检测．· 2．X线检测： 请与本实验无关的放射线和骨科医师进行评估，按股骨头形态，骨密度。及囊性变．硬 化骨情况。按float分为五期 0期z静默期 l期：股骨头外型正常，无塌陷，骨密度均匀，未觅有硬化骨及囊性变，关节间隙正常． 可见有骨小粱模糊． H期；股骨头外型正常，无塌陷。骨密度欠均匀·可见有硬化骨或囊性变， HI期：股骨头外型塌陷，骨密度不均匀，可见有硬化骨或囊性变，关节间隙基本正常 或略窄．骨小粱中断． IV期：股骨头外蛩塌陷·部分或全部被吸收，可有半脱位，骨密度不均匀，可见有硬化 骨或囊性变，关节问隙消失。出现骨关节炎表现． 3．肉眼观察： ☆奎困花是节外拜学术研讨套3， 取出股骨头时肉眼观察标本的形态，血运，硬度，颜色等． 4．组织形态学检查： 股骨头沿冠状面剖开，再沿冠状面切取2ram厚组织作石蜡切片，用4％多聚甲醛(oh =7．2)固定4h，10％EDTA--HCL脱钙，以5oA草酸钠标定到脱钙终点时为止，多聚赖氨 酸处理玻片作HE染色，细胞凋亡检测． and 光镜：HE(hematoxylineosin)染色观察骨小梁形态，高倍镜下(1040)随机选择 10个视野．计数200个骨细胞计算空骨陷窝所占百分比． DBA显色IOMIN。试验设阳性对照与阴性对照染色，当胞核出现蓝染颗粒为阳性细胞 (即凋亡细胞)．结果观察：每张玻片上随机选择10个区域，每个区域计数100个骨细胞， 统计出凋亡的细胞数，即为每1000个细胞中的细胞凋亡数． 验：两指标问相关性用简单相关及直线回归tPo．05为差异有显著性。 结果 一、实验结果 注射组与实验组实验动物均未发生感染． 1．实验开始后2周时的结果； 对照组t 一般情况：实验动物活泼，皮毛丰满，体重无减轻，行动自如． X线表现。为ficat分期0期，即静默期． 肉眼观察：股骨头标本的形态，血运，硬度，颜色均正常． 组织形态学检测：HE染色见骨小粱结构清晰，陷窝内可见大量骨细胞，偶可见空骨 路窝．骨小梁无中断t未见有殷骨头内滋养血管破坏表现．TUNEL检测偶见软骨下区 凋亡的骨细胞． 实验组(激素组，液氨组·创伤组)t 一般情况：实验体重无减轻·皮毛丰满·激素组行动正常，液氮冷冻组，刨伤组动物切 口愈合好，活动行为略少． X线表现：激素组，刨伤组未见有明显病变，刨伤组可见股骨颈处截骨表现．各组按 float分期均为0期． 肉眼观察：股骨头标本的形态，血运。硬度。颜色