FMD感染与免疫动物鉴别诊断方法的建立.pdfVIP

牛羊传染病 FMDVNSP抗体检测试剂盒。 4．2检测FMD感染，必须考虑FMDV各血清型间的差异。因为FMDV7个血清型中每个型的抗原 性与其它6型明显不同，而在每个血清型中也存在很大的抗原差异。有关研究表明，FMDVNSP参与病毒 RNA复制过程，其基因具有高度保守性．体外表达的3ABC蛋白能与FMD全部七个利的血清发生反戍。 型血清的覆盖性．这一点在研究过程中得到了充分的考虑。试验结果表明，该ELISA方法能与检测FMDO、 A、c和亚洲I型标准血清。期望能够用于各型FMD的检测，这对于FMD的监测有很大意义，尤其对当 前的皿洲l型监测工作尤为重要，对此，我们将作进一步应用试验。 4．3一种检测方法对不同动物的适用性。对于FMD监测也很重要。因为FMD是多种动物共患疫病， 流行的最大特点是宿主种类多，包括70多种家畜、实验动物和野生动物口J。试验表明，FMDNSP单抗阻 断ELISA可以同时检测牛、羊、猪血清，也能直接检测豚鼠标准血清和小白鼠血清及单抗腹水。从阻断 ELISA的反应原理出发，该方法期望能够不受动物种属的限制，广泛用于各种家畜、实验动物和野生动物 的FMD诊断和监测．对此我们将做进一步应_}}j研究。 参考文献略 FMD感染与免疫动物鉴别诊断方法的建立 鲁会军，韩松，郑敏，王凯，贾雷立，李昌，金明兰，金宁一 (军事医学科学院11所，长春吉林130062) Bae感受态细菌，在体内 摘要：构建重组杆状病毒的转座质粒pFastBac-3AB，再将该重组质粒转化DHl0 细胞，获得重组杆状病毒。用重组杆状病毒表达的3AB蛋白为抗原建立鉴别口蹄疫感染与免疫动物的 ELISA诊断方法，并对各种反应条件进行优化，包括抗原包被时间、包被浓度、封闭剂、酶标抗体工作浓 度等，制定了检测抗体的间接ELISA操作程序，确定检测样品的临界值。 关键词：重组杆状病毒：表达；蛋白；鉴别诊断；ELISA 捕杀过程中如何检测隐性感染动物，在接种疫苗时如何区分自然感染动物和注苗动物一直是重要问题。感 染过口蹄疫的康复动物体通常仍引起持续感染，并导致病原体在亩群中持续存在，这会造成本病在易感动 物个体之间广泛传播。因此，对口蹄疫病毒及其抗体的严格监测，则为防制口蹄疫提供重要依据，尤其在 区分疫苗免疫动物和野毒感染动物的病原体方面是疫病正确诊断的一项重要内容。自然感染和免疫动物的 鉴别也是01E判定一个国家或地区有无疫情的依据。因此，这项技术的研究为适应当前口蹄疫检疫是十分 必要的。 本研究中的鉴别诊断技术以口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因操作为主，相对于传统诊断技术而言，具 有诊断时间短，敏感性和特异性强等优点，井通过制备口蹄疫病毒标准诊断试剂盒，将使其操作简便易行。 更加适用于临床现场的快速诊断。 1材料与方法 1．I 3AB基因在重组杆状病毒中的表达 1．1．1重组转座栽体的构建 954 ， 第六次垒国会员代表大会暨第11次学术研讨会 I及XoaI酶切后，回收3AB基因 1分别用EcoR 将pMDl8．3AB重组质粒及转座载体质粒pFastBac 片段及线性化的pFastBac 在涂有氨苄青霉素抗性的平板上进行筛选，挑取单菌落，提取质粒酶切鉴定。 DNA的提取 1．1．2质粒DNA的转座与重组Bacmid 按分子克隆实验指南操作． 1．1．3重组Bacmid DNA的转染 取生长良好的sf-9细胞。弃去旧培养基，用无血清无抗生素的Grace’s培养基清洗细胞2次，取 素的培养基，继续培养，观察细胞病变。 I．I．4重组杆状病毒的电镜观察 天冻融后裂解细胞，如此再传一代，收集细胞裂解物。经磷钨酸负染，在透射电镜下直接观察杆状病毒的 数量．以验证共转染的效率。 1．1．5重组表达产物的SDS．PAGE电泳 将重组病毒感染2-3天的gf9细胞，加入适量的细胞裂解液，冰洛作用30分钟后，加入等量2x上样缓 冲溶液煮沸3-5分钟，取适量样品进行SDS电泳