牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立 朱远茂1，王海燕2，薛飞’，辛九庆1，赵立平2，童光志1，郭巍1，李兆利。，相文华1 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001； 2．哈尔滨医科大学动物学部，黑龙江哈尔滨150086) 毒，再经超卢破碎处理后作为诊断抗原，建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验。判定标 证明该方法特异性高、重复性好．与法国进口ELISA抗体诊断试荆盒比较证明其符合率为96．3％，与中和 试验比较符合率为95．8％，而且敏感性更高。应用该诊断方法调卉了我国部分地区IBRV的感染率，发现 这些地区的IBRV感染率为67．10％。 关键词牛传染性鼻气管炎牛疱疹病毒I型酶联免疫吸附试验 bovinerhinotracheitis 牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious 种重要的病原，可引起牛严重的呼吸道感染．结膜炎、脑炎，产奶下降，子宫炎、肠炎，传染性脓疱性外 节造成潜伏感染或散毒，病牛可终身带毒，给本病的防制带来很大的困难[21。牛传染性鼻气管炎(IBR) 采取了不同的诊断和控制手段，包括屠宰刚性感染牛，使用修饰活疫苗、灭活疫苗或基因标记疫苗等。 到目前为止，在欧盟有些国家已经成功消灭了IBR。如瑞士在IBR首次爆发后．实行检测并扑杀血清阳 性牛，十年就基本消除了本病，约有5万头牛在IBR根除过程中宰杀，共花费1．1亿瑞士法郎，而且每年还 需要5百万瑞士法郎维持扑杀计划14L，有些国家正在使用标记疫苗井配套鉴别诊断方法实施控制或消灭该病 immunosorbent 的计划，在这个过程中，酶联免疫吸附试验(Enzyme．1inked assay，ELISA)因其敏感性高的特点 得到广泛应用，国际兽疫局采用欧盟三个标准参考血清以便规范ELlSA诊断标准并作为研究新的检测血清 或牛奶中的IBRV抗体的标准参考血清【，J。 我国自70年代从进12种牛中发现了本病。并己分离和鉴定了病毒。1980年从新西兰进El牛中检测到 抗体，随后在本地牛群中也查到抗体，并从广西当地牛群中分离到病毒。国内部分省区血清学普查结果表 明，北京、广东、广西、河南、河北、新疆、山东、四川等地的黑白花奶牛、本地黄牛和水牛中都有IBRV 感染，给养牛业造成一定的经济损失。杨春明应用间接血凝试验，对青海省刚察地区的牛进行了IBR血清 学调查显示IBRV感染率为30．6l％16】。而且我国目前还没有自主生产的疫苗可供使用，也缺乏快速敏感的诊 断方法。本研究建立了检测IBR血清抗体的快速、敏感、特异的间接ELISA诊断方法，为我国日后实施控 制井消灭该病的计划奠定了一定的基础，现将试验结果报告如下。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1病毒和细胞IBRV BarthaNu／67株由本所保存，牛肾细胞系(MDBK)购自中国兽药监察所。 1．1．2抗体IBR阡I性血清，IBR阴性血清均购自中国兽药监察所；血清样品由各地采集。 R 1．1．3主要试剂及仪器兔抗牛IgO辣根过氧化物酶(H P)标记抗体购白Sigma公司；健康马血清由本室 采集；Ultraspeea3000紫外分光光度仪(PharmaeiaBiotech，INC．)；pH计(Beckman320 (REVCO公司)；其它试剂为上海生物工程有限公司产品。 1．2方法 975 牛羊传染病 1．2．1诊断抗原的制备IBRVBarthaNu／67株第9代毒(106 0C 48hr后细胞病变达80％收毒，．20℃反复冻融3次经4C5000r／min离心30rain，取上清430000r／min离心 1．5hr．沉淀用pH7．4 其含龟为9．38mg／m1．