微量补体结合反应法检测牛、羊副结核病的研究.pdfVIP

牛羊传染病 微量补体结合反应法检测牛、羊副结核病的研究 颜思通林志雄朱道中鱼海琼曹志玲 (广州出入境检验检疫局动检室，广州广东510623) 摘要采用中华人民共和国山入境检验检疫行业标准》“副结核病补体结合试验操作规程”方法(简称 常量法)和微量补体结合反应方法(简称微量法)检测3677头进I=1牛羊的副结核病抗体并进行比较。结 果表明，常量法利微量法的溶血索效价测定值相同，补体效价测定值近似，阴性血清对照、抗原对照、补 体对照、红血球对照、血清抗补对照结果均相同，阳性对照血清效价微量法比常量法提高1个滴度，被检 血清的阳性检出率微量法高于常量法。比较37℃水浴及37(3恒温培养箱环境下的微量法补反试验结果， 溶血素效价、补体效价、各项对照试验结果完全相同，被检血清在37℃水浴反应更加充分。比较用变态反 应法和补体结合反应法检验3677头牛羊副结核病的结果、以及用补体结合反应法、变态反应和酶联免疫 吸附试验方法同时检测2024头牛的结果，发现它们的相关性很小。 关键词： 副结核病 补体结合反应 微量法 fixationtest 补体结合反应(complementC．F)是一种经典的试验方法，用来检验动物(包括人类)遭受 某些病原感染或免疫后所产生的血清抗体。补体结合反应的操作过程非常繁杂，改良方法众多，检测不同 疾病的补反试验规程方法也不尽一致，多数疾病的补体结合试验，即使在本试验部分采用微量法，但预备 方法口】。由于补反试验操作复杂繁琐，尤其在补体效价测定过程，稍为疏忽就会出错，令许多人望而生畏： 因此，在多数基层试验室都不开展这个检验项目。但该方法特异性强，敏感性好，结果稳定。试验成本相 对低廉等优点，又是其它方法所不能比拟的。我们结合人医的技术方法l”，试图寻找一套操作简洁快捷、 结果稳定准确、比较完整的微量补体结合反应方法，包括微量法测定溶血素效价和补体效价，及微量法测 定血清副结核病抗体滴度；使之更加简洁、直观。成为适合多数基层试验室条件．为更多人乐意选用的试 验方法。 找到既不影响试验结果，又简单方便、容易操作、适合微量补反法反应的最佳环境条件。应用于牛羊副结 核病检验的主要试验方法，有迟发型过敏反应(delayed—type 反应、检测血清抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)或补体结合反应等方法，这些方法是否互相联系?是 否可以互相代替?基于以上问题，在对3000多头牛羊的检疫过程中，进行相芙研究。 1材料和方法： 1．1．材料 1．1．1．补体、溶血素、副结核补反抗原、标准副结核阴性、阳性对照血清、禽型提纯结核菌素(PPD)均 为中国兽医兽药监察所生产． 球泥用生理盐水配成3％红血球悬液。 ． 1．1．3．被检血清：分别采集从美国和澳大利亚进口牛羊的血清，试验前水浴灭活。 1．1．4．ELISA试剂盒：澳大利亚CSLLIMITED公司生产。 1．1．5．仪器设备：酶标仪、恒温培养箱、水浴箱、离心机、移液器、玻璃小试管、96孔u型微量反应板等。 1．2．方法 1．2．1．微量法补反试验 ． 1．2．1．1．溶血素效价测定： 价测定。 ． 986 第六敖全国会员代表大会暨第11砍学术研讨会 表1：溶血素效价测定法 单位：ul 孔号 l 2 3 4 5 6 对 照 各稀释度溶 l：1000l：20001：30001140001150001：6000l：100补体 盐水 血素 25 25 25 25 25 25 25 生理盐水 50 50 50 50 50 50 75 75 100 1：20补体 25 25 25 25 25 25 25 3％红细胞 25 25 25 25 25 25． 25 25 25 37℃水浴