包埋脱水法冷冻保存裙带菜配子体克隆的研究-海洋学报.PDFVIP

第27 卷 第2 期 海 洋 学 报 V ol . 27, No . 2 2005 年3 月 A CT A OCEA N O L O GICA SIN ICA M arch 2005 1 1 1 2 1 王起华 , 刘艳萍, 张恩栋 , 李大鹏, 张岚翠 ( 1. 辽宁师范大学 生命科学学院, 辽宁 大连 116029 ; 2 . 中国科学院海洋研究所, 山东 青岛266071) 将裙带菜配子体克隆包埋在含3% 褐藻酸钙 胶球中, 研究了预培养中 蔗糖浓度和培养时 间, 脱水过程中 脱水速率和胶球含水量以及化冻速度对配子体克隆 存活率和发育能力 影响, 结果表明含裙带菜配子体克隆 胶球在0. 3 mo l/ dm 3 蔗糖培养基中培养9 h 可以获得较高 存活 率; 胶球最适平均脱水速率为含水量 5% 每小时, 最适含水量为25 % ; 较快 化冻速度可以显著 提高配子体克隆 存活率, 在优化条件下存活率可高达66% ; 经过冷冻保存 裙带菜配子体克隆 在适合发育 条件下能够正常形成孢子体. 裙带菜配子体克隆; 冷冻保存; 包埋脱水法; 存活率 Q 33 A 2005) 020 1540 6 护剂, 使其应用受到一定的限制. 20 世纪90 年代初 1 引言 发展的包埋脱水法操作简单, 不需要复杂设备, 通常 裙带菜是一种味道鲜美、营养价值高又可作为 不使用抗冻保护剂, 是对超低温保存技术的一个重 保健品的食用海藻, 是我国大规模生产养殖的主要 大发展[ 7, 10] . 近年来随着藻类细胞固定化技术的发 [ 1 1] 经济海藻之一. 同海带配子体一样, 裙带菜配子体也 展 , 包埋脱水法已开始用于藻类的冷冻保存并取 可以形成无性繁殖系, 并在合适条件下发育成孢子 得了初步成功[ 12~ 15] , 但是用此法保存裙带菜配子体 [ 1~ 3] 体, 这在育苗生产中有重要意义 . 在超低温( 液 克隆的研究目前尚未见报道. 本文采用包埋脱水法 氮, - 196 ) 条件下保存藻类种质具有省时、省力、 研究了预培养中的蔗糖浓度、培养时间和脱水过程 减小污染概率以及能保持遗传稳定性从而实现种质 中的脱水速率、含水量等因素对裙带菜配子体克隆 [ 4~ 7 ] 长期保存等多方面的优点 , 但是采用该技术保 冷冻保存的影响. 存裙带菜配子体克隆的研究尚鲜有报道. A rb ault [ 8] [ 9] 2 材料和方法 等 和 G in sburg erV og el 等 都曾采用过两步冷 冻法保存裙带菜配子体, 但只获得了很低的存活率. 2. 1 Renard 等( 见文献[ 4] ) 也曾采用两步法保存裙带菜 裙带菜配子体球形丝状体克隆细胞( Undaria 配子体, 并报道了高达近 50 % 的存活率, 但是保存 p innatif ida, gametop hytes U V 和 U V ) 由中 材料仅在液氮中冻存了15 m in, 比超低温保存操作 国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室提 中通常采用的24 h 保存时间要短得多. 这表明要成 供.