炭样小单孢菌中抗生素生物合成相关蛋白的筛选.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（７）：５５６３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 炭样小单孢菌中抗生素生物合成相关蛋白的筛选 陈　娟　杨慧林　黄运红　龙中儿 （江西师范大学生命科学学院　南昌　３３００２２） 摘要　目的：筛选一株具有广谱抗菌活性的炭样小单孢菌ＪＸＮＵ１中核苷类抗生素生物合成相关 蛋白。方法：通过ｉＴＲＡＱ定量蛋白质组学技术对ＪＸＮＵ１菌体生长期（３６ｈ）和产物合成期（１０８ｈ） 的差异蛋白进行鉴定和功能分析。结果：基于ｉＴＲＡＱ定量蛋白质组学技术共鉴定出炭样小单孢 菌总蛋白质２３９０个，差异表达蛋白１７２个，在产物合成期（１０８ｈ）表达上调７６个、表达下调９６ 个。通过蛋白ＧＯ和ＣＯＧ注释等功能分析，筛选出１２个与抗生素合成密切相关蛋白和５个生物 合成基因簇。结论：利用ｉＴＲＡＱ技术筛选出炭样小单孢菌ＪＸＮＵ１的抗生素合成相关蛋白，为阐 明该抗生素的生物合成机制奠定实验依据。 关键词　炭样小单孢菌　蛋白质组学　抗生素　生物合成途径　基因簇 中图分类号　Ｑ５９１．２ ［６］ ［７］ 　　核苷类抗生素是一类主要由微生物产生的，具有 类抗生素ＪＸ 。江云等 对炭样小单孢菌ＪＸＮＵ１的 生物活性的次级代谢产物，通常是由核苷或核苷酸经 全基因组序列进行了测定和注释，相关序列已提交至 过一系列后修饰所形成的结构比较精细复杂的分子， ＧｅｎＢａｎｋ数据库（ＪＸＳ。但该抗生素的生物 具有广谱生物活性，如抗真菌、抗细菌、杀虫、除草、抗 合成相关基因和蛋白质并不清楚。 ［１］ 　　本研究通过ｉＴＲＡＱ定量蛋白质组学技术对ＪＸＮＵ１ 肿瘤、抗病毒及免疫抑制和激活作用等 。生物活性 与结构密切相关，结构简单的核苷类似物通常抑制核 菌体生长期（３６ｈ）和产物合成期（１０８ｈ）的差异蛋白进 酸的生物合成，结构复杂的核苷类似物则对蛋白质或 行鉴定和功能分析，筛选出与抗生素生物合成相关蛋 多糖的生物合成有抑制作用，因此核苷类抗生素自发 白，为阐明抗生素ＪＸ的生物合成与分子调控机制奠定 ［２］ 基础，为进一步提高抗生素ＪＸ产量和新型药物的开发 现以来便得到广泛应用 。 　　实验室在前期研究中获得一株具有广谱抗菌活性 提供理论依据。 的炭样小单孢菌 ＪＸＮＵ１（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃａｒｂｏｎａｃｅａ １　材料与方法 ＪＸＮＵ１），其发酵产物对金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢 杆菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌，以及伤寒沙门氏 １．１　菌株及培养基 菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌都有 　　炭样小单孢菌ＪＸＮＵ１（Ｍ．ｃａｒｂｏｎａｃｅａＪＸＮＵ１）由 ［３４］ ［５］ 本实验室从土壤中分离得到。培养基：高氏Ｉ号培养 很强的抗菌活性 。朱跃进等 系统研究了该菌发 ［６］ 酵产抗生素的工艺过程，确定了该菌发酵产抗生素的 基、种子培养基和发酵培养基 （实验过程中所用试剂 影响因素及其作用规律，建立了从该菌发酵液中分离 均为生化试剂或分析纯化学试剂，下同）。 纯化抗生素的方法，并从中获得了层析纯的单组分、粉 １．２　炭样小单孢菌培养 ［６］ 末状抗生素