烟草小孢子母细胞减数分裂过程中微管分布变化-中国细胞生物学学报.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(1): 15−19 研究论文 烟草小孢子母细胞减数分裂过程中微管分布变化 1 2 3 3 2* 王雅英 　张亚楠 　王宏毅 　林石明 　田惠桥 (1 厦门医学高等专科学校, 厦门361008; 2 厦门大学生命科学学院, 厦门 361005; 3 厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 厦门 361026) 摘要　　应用间接免疫荧光标记技术和激光共聚焦扫描显微镜成像技术观察了烟草小孢子母 细胞减数分裂过程中微管的分布变化。在减数分裂前期, 小孢子母细胞中的微管较短, 随机分散在 细胞质中。在减数分裂中期, 细胞质中微管形成纺锤体, 控制染色体的分布。进入减数分裂Ⅰ后期, 部分纺锤体微管将两组染色体拉向两级。在减数分裂II 中期, 细胞中的微管又形成两个纺锤体。在 减数分裂II 后期, 纺锤体微管解聚为微管蛋白分散在细胞质中。胞质分裂发生在四个细胞核形成 之后, 通过细胞核之间的质膜向内缢缩分隔四个细胞核, 产生四个小孢子。 关键词　　烟草; 减数分裂; 微管 在植物细胞分裂过程中, 细胞骨架调控了细胞分 Da Qing Ye)种植在厦门大学植物园内。取开花前减 裂方向、染色体的运动和新细胞壁的形成[1] 。在高 数分裂期的花药固定。固定液为4% 多聚甲醛和5% 等植物的有性生殖过程中, 生殖细胞中的细胞骨架研 甘露醇、PIPES 50 mmol/L 缓冲液(pH 6.9) 、EGTA 究一直是一个活跃的领域。这些研究包括花粉萌发 5 mmol/L 、MgSO4 2 mmol/L 。固定液中附加10% 时的细胞骨架变化特征[2]; 花粉管极性生长中的细胞 的二甲基亚砜(DMSO)和1% 的Triton X-100 。花药 骨架分布特征以及细胞器的运动和生殖细胞与两个 在室温固定1 h 后用PIPES 缓冲液冲洗3 次, 每次 [3~7] 精细胞在花粉管中的定位 ; 雌性胚囊细胞中的细胞 5 min 。取出花药, 在涂有多聚赖氨酸溶液的载玻片 骨架分布变化与精细胞的运动[8~10]; 卵细胞受精后启 上, 轻压花药使药室内的细胞散出。 动胚胎发生过程[11]等。减数分裂是高等植物有性生 酶解: 将1% 的蜗牛酶(PIPES 缓冲液配制)覆盖 殖的一个关键事件, 大、小孢子母细胞连续分裂两 于细胞之上, 室温保湿酶解10~15 min。酶解后, 用 次, 形成单倍体的孢子。Brown[12]和Lemmon[13]在上 PIPES 缓冲液洗3 次。 世纪80~90 年代对兰花小孢子发生中细胞骨架特征 免疫反应预处理: 用1%的牛血清蛋白溶液(PIPES 做了系统的研究。Shamina[14]对多种单子叶植物和 缓冲液配制, pH 6.9)覆盖细胞1 h, 并用磷酸缓冲液 双子叶植物的小孢子母细胞进行了初步的微管骨架 (PBS)洗三次。磷酸缓冲液含NaCl 138 mmol/L 、 分布特征的对比研究; 重点观察了单子叶植物小孢子 KCl 2.68 mmol/L 、KH PO 1.47 mmol/L、Na HPO 2 4 2 4 母细胞减数分裂时的微管骨架的分布特征。张正海 8.1 mmol/L 。 等[15]对小胡杨小孢子发生中微管骨架的变化进行了 微管免疫反应: 经上述处理过的细胞, 先与一 荧光显微镜观察。他们发现许多小孢子中的微管分 抗—— 鼠抗微管蛋白(Sigma, PBS 缓冲液稀释, 稀释 布异常, 推测这些异常现象可能是因为小胡杨是小叶 度为1 ∶350)反应, 在一定湿度中37 ℃温育1 h, PBS 杨与胡杨杂交后代的原因。被子植物小孢子发生有 缓冲液冲洗3 次, 每次10 min。再用二抗——FITC 两种类型, 同时型和连续型。本实验对烟草