高复制HBV转基因小鼠建立及应用研究概况.pdfVIP

论文汇编 第五届中南地区实验动物科技交流套 高复制HBV转基因小鼠建立及应用研究概况 刘光泽1，顾为望1，易学瑞2，扬富强2，任向荣2 (1_南方医科大学实验动物中心。广州510515； 2．中国人民解放军第458医院肝病重点实验室，广州510600) 众所周知。乙型肝炎病毒宿主特异性强，只感染人和黑猩猩等灵长类动物，不感染常规实验动物 使乙肝及防治药物研究一直缺乏理想的动物模型。而乙型肝炎为我国的常见及多发病，全国人群感 染率约达60％，乙型肝炎携带者I亿多人，占全世界携带者的I／3以上，每年肝炎发病达269万例， 每年因患乙型肝炎转变肝癌致死者达16万人以上，因此，乙型肝炎是严重危害人类健康的传染性病 等制备出稳定高复制HBV转基因小鼠，才使HBV转基因小鼠模型真正达到实际应用水平，迄今为 止被国内外公认较理想实用HBV转基因小鼠模型。国内自1995年一些单位先后研究建立HBV转 基因小鼠．但囚其在复制、表达、传代稳定性、实用性等方面存在一些问题而难以应用。为提高我国 因小鼠，至今稳定传至13代，已被全国50余家科研单位所应用于乙型肝炎免疫耐受、药物验证、治 疗性HBVDNA疫苗和蛋白疫苗药效评估等多方面应用研究。 1 高复制HBV转基因小鼠的建立与国内外比较 在本研究中我们筛选了含增强子I、增强子Ⅱ和核心启动子I．3倍HBV基因进行转基因研究。 化后，用显微注射法注人Balb／c小鼠受精卵雄性原核而建立。 。 裹1 HBV—Tg血清可定量检测指标及阳性率 $以HBsAg阳性鼠为基数 取转基因小鼠肝、脾、肾、胸腺、小肠、肌肉等组织进行HBsAg、HBcAg免疫组化及组织病理学检 DNA，与公认国外较理 病理变化。血清中可检测到高滴度HBsAg、Pnsl、HBeAg，且有高水平的HBV 高，HBVDNA复制水平相当，且血清中HBsAg、HBVDNA水平较稳定，性别之间无差异；同国内相关 DNA均较高且可量 HBV转基因小鼠模型比较，则本模型表现为血清乙肝病毒指标HBsAg和HBV 化，HBVDNA为104一106copy／m1．同时血清pre 2)。 191 第五届中南地区实验动物科技交流会 论文汇编 袭2 HBV转基因小鼠模型主要技术参数指标与国内外同类模型的比较 本HBV转基因鼠模型已克服一些转基因鼠存在的传代表达不稳定，复制水平过低等缺陷，使本 HBV转基因小鼠更具有模型实用价值，满足了药物评价动物模型的要求。各项检测指标表明本稳定 高复制HBV转基因小鼠模型是国内目前最为理想HBV转基因动物，并达到国外同类研究先进水 平。 2 HBV转基因小鼠对乙肝免疫学发病机理的应用研究 起的增殖反应和其培养物上清中上述四种细胞因子含量均明显低于对照!ll(PO．01)。 淋巴细胞培养液上清中细胞因子的含量(X±S)(p∥m1) 乙肝疫苗免疫2周后，取实验动物脾组织并分离制备细胞悬液，用Elispot试剂盒检测HBsAg(终 明HBV转基因小鼠机体对乙肝病毒免疫在T细胞水平存在应答状态低下。(见表3) T细胞斑点数的变化(X±S) 表3实验鼠对HBsAg刺激分泌IFN一1 192 论文汇编 第五届中南地区实验动物科技交流套 aPO．01 v3正常鼠免疫组 上述结果提示HBV转基因小鼠的特异细胞免疫机制以及T细胞亚群的免疫功能受到抑制，转 因小鼠T细胞对tlBsAg免疫应答状态低下，进一步证明了HBV转基因小鼠对乙肝病毒存在免疫耐 受。这有助于解释转基因鼠缺少肝