斑节对虾腺苷酸转移酶pmant基因的cdna克隆与表达分析孙文文.docVIP

斑节对虾腺苷酸转移酶（PmANT）基因的cDNA克隆与表达分析 孙文文1,2，周发林1，黄建华1，邱丽华1，杨其彬1，江世贵 （1.中国水产科学研究院南海水产研究所，广东 广州 510300； 2.上海海洋大学 水产与生命学院，上海 201306） 摘要：利用RACE技术获得了斑节对虾（Penaeus monodon）ANT基因（PmANT）的cDNA序列。该序列全长1388bp，开放阅读框（ORF）为930bp，3′非编码区（UTR）为393bp，5′非编码区（UTR）为65bp。ORF可编码309个氨基酸，分子量大约为33.622ku。与所有ANT家族成员一样，PmANT蛋白具有3个重复同源的线粒体跨膜结构域，但不含信号肽和糖基化位点。相似性、同源性及系统进化树分析显示，斑节对虾的ANT基因与凡纳滨对虾的同源性和相似性最高，并与其聚为一支。采用荧光定量的方法研究了ANT基因在雌雄个体不同组织、卵巢不同发育阶段及未成熟和成熟精巢的差异表达情况。结果表明：PmANT的mRNA在各组织中都有表达，其中，在雄性个体的肌肉中表达量最高，其次为雌性肌肉，而在精巢的表达量最低，且未成熟精巢低于成熟精巢。PmANT的mRNA在卵巢的表达量高于精巢，且在Ⅲ期卵巢表达量最高，Ⅳ期最低。为今后进一步研究该基因在斑节对虾性腺发育中的作用提供基础材料。 关键词：斑节对虾；腺苷酸转移酶；克隆；组织表达 研究亮点：目前对斑节对虾性腺发育的分子调控机理还知之甚少，有大量性腺发育相关基因还不为人所知。本论文研究了腺苷酸转移酶在斑节对虾卵巢发育各期和未成熟及成熟精巢的表达谱，为阐明斑节对虾性腺发育分子调控机理提供基础材料。 中国分类号： 文献标识码： Molecular cloning and expression analysis of adenine nucleotide translocase （PmANT）in Penaeus monodon SUN Wen-wen1,2, ZHOU Fa-lin1, HUANG Jian-hua1, QIU Li-hua1, YANG Qi-bin1, JIANG Shi-gui1 (1.South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510300，Guangdong,China; 2.College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306，China) Abstract: The adenine nucleotide translocase (ANT) is the most abundant mitochondrial inner membrane protein, which catalyzes the exchange of ADP and ATP between cytosol and mitochondria and participates in many models of mitochondrial apoptosis. In the present study, the full sequence of P. monodon ANT gene was cloned and named PmANT. The full length cDNA of PmANT contained a 5’ untranslated region (UTR) of 65bp, a 3’ UTR of 393bp and an ORF of 930bp encoding a polypeptide of 309 amino acids with an estimated molecular mass of 33.622kD. As other animal ANTs, the structure of the PmANT protein consists of three homologous repeated domains. But there are not signal peptide and glycosylation sites in PmANT protein. Sequence alignment analysis showed that the PmANT with the ANT of Litopenaeus vannamei shared a similarity of 98.7% and the homology of 97.4%. Analys