禽流感h9n2亚型酶标抗体的制备及双抗夹心dot-elisa检测方法的.pdfVIP

DOI :10.15933/j.cnki .1004 -326 .2006.10.034 河南农业科学 (H9N2 ) Dot-ELISA 张春杰, 王大军, 吴庭才, 李银聚, 余祖华, 程相朝 (, 471003) :采用AIV 灭活油乳苗(H9N2)对AIV 非免疫鸡进行接种并获取高免血清, 取高免血清采用 饱和硫酸铵沉淀法, 经 Sephadex G25 层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG 应用 碘酸 钠法标记辣根 氧化酶(HRP), 制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP), 利用所提取的AI-IgG 和所制 备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot-ELISA 试验操作步骤, 采用方阵法分别摸索包被抗原及 酶标抗体的最佳浓度, 以及各步反应时间等最佳反应条件, 以建立一种优化的AIV 双抗夹心Dot- ELISA 检测法。结果表明, 所制备的AI 高免血清HI 效价为10log2;AI 酶标抗体克分子比值为2. 45;优化的Dot-ELISA 各条件为:包被AI-IgG 最佳稀释倍数为1 ∶50;最佳封闭剂为 1%牛血清 白蛋白;AI 酶标抗体最佳稀释倍数为1 ∶100;待检抗原与2 种抗体的感作时间均为0.5h (37 ℃)。优 化后的检测方法可在2.5h 内诊断结果, 制备好的包被膜在4 ℃下保存 2 个月不影响其效果。而且 敏感性提高了3 倍, 与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。 :禽流感;酶标抗体;双抗夹心Dot-ELISA :S 52.65　R446.61　　:A 　　:1004-326 (2006)10-0101-04 Preparation of Enzyme-labeled Antibody and Establishment of Double-antibody Sandwich Dot-EIISA Detecting Avian Influenza Virus(H9N2) ZHANG Chun-jie, WANG Da-jun, WU Ting-cai, Li Yin-ju, YU Zu-hua, CHENG Xiang-chao (College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China) Abstract:The chicken w ere inoculated by Avian Influenza(AI)inactivate vaccine(H9N2)and hyper- immune serum w as obtained from these chicken.The hyperimmune serum w as treated with saturation (NH4 )2 SO4 deposition method and Sephadex G25 floor analysis column to obtain purified AI-IgG. Then AI-IgG w as labeled w ith horseradish peroxidase by NaIO method to prepare AIV enzyme-la- 4 beled antibody (IgG -HRP).According to the steps of sandw ich Dot -ELISA and square matrix method, sandw ich Dot-ELISA detecting the antigen of AIV w as developed.The results show ed that the HI titre of AI hyperimmune serum w as 10lo