大鼠glut3基因启动子区荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定.pdfVIP

海南 医学 院学报 2012，18(5) JournalofHainanMedicalUniversity 577 D0I：CNKI：46-1049／R1122．025 网络 出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／46．1049．R1122．025．html 大 鼠GLUT3基因启动子区荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定 郑传宜 。，杨 垫 ，李军亮 ，白恩琪。，李方成。 (1．海南医学院附属医院神经外科 ，海南 海 口 570102；2．中山大学附属孙逸仙纪念医院神经外科 ，广东 广州 510120；3．海 南医学院附属医院检验科 ，海南 海El 570102) [摘要] 目的：克隆大鼠葡萄糖转运体3(glucosetransporter3，GLUT3)基因启动子区，并构建其萤火虫 荧光素酶报告基因载体。方法：在对大鼠GLUT3基 因5侧翼 区进行详尽生物信 息学特征分析后 ，设 计相应引物，用 PCR的方法从大鼠基 因组 中扩增 出GLUT3基 因 5侧 翼 区一1037～ 155bp段长为 1292bp的启动子 区(以翻译起始点 ATG为+1)，再用定 向克隆的方法将这一启动子 区片段定向重组 入专门用于启动子活性研 究的萤火 虫荧光素酶报 告基 因载体 (pGL3一basic)中，构建 出包含大 鼠 GLUT3基 因启动子区的萤火 虫荧光素酶报告基 因载体 (pGL3-GLUT3)，电泳与测序鉴定 ，最后再将 pGL3-GLUT3与 内参 pRL—TK用脂质体转染的方法瞬时共转染PC12和原代培养的神经元 中，通过 双荧光素酶报告基 因检测系统鉴定 pGL3-GLUT3的启动子活性 ，并用独立样本 t检验方法进行统计 分析 。对照组共转染 pGL3一basic与 内参 pRL-TK。结果：构建 出荧光素酶报告基 因载体 pGL3一 GLUT3。与转染空质粒 pGL3一basic组相比，原代神经细胞中转染 pGL3一GLUT3组荧光素酶活性升高 (5．1829±0．2648VS2．8931±0．7754，P一0．008)，在 PC12细胞中转染pGL3一GLUT3组荧光素酶活 性也升高(2．7977土0．5120VS1．1798±0．3125，P一0．olo)。结论 ：成功克隆GLUT3基 因启动子 区， 并构建出包含 GLuT3基 因启动子片段的荧光素酶报告基 因载体 ，并且在 PC12和原代培养的神经元 中pGL3一GLUT3可以表现 出启动予活性。这为后续大鼠GLUT3基因转录调控研究提供研究素材。 [关键词]启动子 ；大鼠；葡萄糖转运体 3(GLUT3)；荧光素酶报告基 因载体 [中图分类号]RQ95—33；Q782 [文献标识码]A [文章编号]1007—1237(2012)05—0577—05 Constructingand identifyingofthefireflyluciferasereportergenevectorpGL3一GLUT3 ZHENG Chuan—yi’，YANG Kun ，LIJun—liang。，BAIEn—qi。，LIFang—cheng (1．NeurosurgeryDepartment，theAffiliatedHospitalofHainanMedicalCollege，Haikou570102， China；2．NeurosurgeryDepartment，theSecondAffiliated Hospitalof Sun Yat—senUniversity， Guangzhou510120，China，510120；3．ClinicalLab，theAffiliatedHospital0fHainanMedicalCol— lege，Haikou570102，China，570102) 1 跏 P ect]：Itis 删 Fundj~rScienceResearchofHealthDepartmentofHairw：nProvince(~0956)， NaturalScientificFundofGuangdongProvince(7001600)，NationalNaturalScientificFund(30770