耐碱和耐热木聚糖酶研究进展3.pdfVIP

中　国　生 　物 　工 　程 　杂 　志 第 23 卷第 7 期 CHINA BIOTECHNOLOGY 2003 年 7 月 耐碱和耐热木聚糖酶研究进展 解复红 　李文鹏 　张克勤 ( 云南大学云南省工业微生物发酵工程重点实验室 　昆明　650091) 摘要 　木聚糖酶是一种重要的工业用酶 ,近年来由于它在制浆和造纸工业中的特殊用途而受到 广泛关注 。在制浆和造纸工业中需要耐碱和耐热的木聚糖酶 。要得到这样的木聚糖酶有两种办 法 ,一是从极端环境中筛选这样的高产木聚糖酶的微生物 ,其二是用先进的生物技术对现有的木 聚糖酶进行遗传改造 , 以达到耐热和耐碱的目的。 关键词 　木聚糖酶 　制浆和造纸 　定点突变技术 　蛋白质工程 　易错 PCR 技术 ( β ) 　　木聚糖酶 1 ,4 Dxylanase ; EC3 . 2 . 1. 8 是一 向了碱性木聚糖酶 ,筛选了很多具有应用前景的碱 种重要的工业用酶 ,广泛用于饲料 、食品和酿造工 性木聚糖酶的生产菌株 。另外 ,木聚糖在碱溶液中 业 。自从发现木聚糖酶可以用于纸浆的漂白以后 , 是可溶的 ,因此 ,碱性木聚糖酶就很容易将溶液中 国内外对木聚糖酶研究和开发非常关注 ,主要原因 的木聚糖降解掉 。 [2 ] 是用木聚糖酶对纸浆进行预处理后 ,可大大减少后 Horikoshi 等 于 1973 年首次报道了来 自碱性 续漂白过程中氯化物的用量 ,从而大大降低制浆和 细菌中的木聚糖酶 。从碱性细菌 B acillus sp . No . 造纸工业对环境造成的污染 。 C592 中纯化的木聚糖酶的最适 p H 是 60～80 。 制浆过程是在碱性的条件下 ,用高温蒸煮的方 碱性细菌 B acillus No . C125 产生 2 种木聚糖酶 :木 法除去木屑中的木质素 。因此 ,用于纸浆漂白的木 聚糖酶 A (分子量为 43kDa) ,和木聚糖酶 N (分子量 聚糖酶应是耐热和耐碱的。而到目前为止 ,工业上 为 16kDa) 。木聚糖酶N 在p H 6～7 时的活性最高 , 用于纸浆漂白的木聚糖酶大多是中性偏酸的 ,最适 而木聚糖酶 A 在 p H 6～10 时的活性最高 ,甚至在 反应温度大多在 45 ℃以下[ 1] ,这就要求在加酶之前 p H12 时也有一定的酶活[3 ] 。 先将纸浆的p H 和温度调到适合木聚糖酶作用的 自从发现木聚糖酶具有生物漂白功能以来 ,分 范围 ,这是一个费时和费力的过程 。而用耐热和耐 离出了很多热稳定性的碱性木聚糖酶 。Dey 等[4 ] 碱的木聚糖酶就省去了这个麻烦 。 分离的嗜碱嗜热菌 B acillus sp . (NCIM59) , 能产生2 可以通过两种途径获得耐热和耐碱的木聚糖 种不含纤维素酶的木聚糖酶 ,它们的最适 p H 值和 [ 1] 酶 。第一是从极端环境中筛选木聚糖酶产生菌株 。 温度分别为p H10 和 50 ℃。Khasin 等 用一步纯化 本实验室正从极端环境中筛选耐热和耐碱的木聚 法得到了碱性菌株 B ac