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猪DIO3基因组织表达谱和印记研究 　　摘要：采用荧光定量PCR方法分析了猪DIO3基因在组织中的表达状况。结果表明，DIO3基因主要表达于背部脂肪组织，在肝脏、子宫、肾脏、心脏、小肠、肌肉和胃组织中呈中度表达，在脾脏和肺脏中表达量很低。采用外显子687 bp处的A/C突变（A/C 687）检测该基因在猪胚胎组织中的印记状态，DIO3基因在所有组织中均表现为印记。 关键词：猪；DIO3基因；组织表达谱；印记分析 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）21-5345-03 Expression and Imprinting Analysis of Porcine DIO3 Gene QIAO Mu1，WU Hua-yu1，HUANG Jing-shu2，PENG Xian-wen1，DU De-li3，LI Han-he3， ZHANG Kai-xuan3，MEI Shu-qi1 （1.Institute of Animal Husbandry and Veterinary/Hubei Key Laboratory of Animal Embryo Engineering and Molecular Breeding， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064， China； 2.Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Hubei Province，Wuhan 430064， China； 3.Wuhan Tianjian Agricultural Development Co.， Ltd.，Wuhan 430300，China） Abstract： Real-time RT-PCR was performed to analyze the porcine DIO3 gene tissue expression pattern. The porcine DIO3 gene was expressed predominantly in backfat， mildly in liver， uterus， kidney， heart， small intestine， muscle and stomach， and almost absent in spleen and lung by realtime fluorescence quantitative PCR. A single nucleotide polymorphism in exon （A/C687） was used to investigate imprinting status in porcine embryonic tissues. The results indicate that DIO3 was imprinted in all the tested tissues. Key words： pig； DIO3 gene； tissue expression； imprinting analysis 甲状腺素脱碘酶Ⅲ（Deiodinase iodothyronine type Ⅲ，DIO3）能够使四碘甲状腺原氨酸（T4）和三碘甲状腺原氨酸（T3）内环脱碘导致甲状腺激素失活[1]，在甲状腺激素代谢过程中起着关键作用[2]。甲状腺激素是调节机体生长发育及调控碳水化合物、脂肪、蛋白质等三大营养物质代谢的重要因子，DIO3基因通过调节甲状腺激素的代谢而影响机体生长发育及营养物质的代谢，因此，DIO3是调控生长发育和营养代谢的重要调节因子。该基因在成人组织中活性很低，且仅表达于皮肤、子宫和脑等组织[3]，但是在蜕膜组织、胎盘组织和胎儿组织中表达量较高[4，5]。 基因组印记是一种基因表达依赖于其亲本来源的表观遗传现象。尽管双亲来源的两条染色体具有相同的遗传序列，但是印记基因只表达一个亲本来源的等位基因[6]。DIO3基因位于Dlk1-Dio3印记簇最远端，在DLK1基因下游-800 kb处[7]。在小鼠中DIO3基因表现为母本印记、父本表达[8，9]。本研究采用PCR-RFLP方法分析了猪DIO3基因的印记状态，并研究其表达模式，为进一步研究猪印记基因对猪生长发育的调控和功能基因的分子遗传机理具有重要的意义。 1 材料与方法 1.1 动物和组织样品 用于印记分析的样品：采集自大白猪和梅山猪正反交后代65日龄胚胎（华中农业大学试验猪场）的10个部位组织（心脏、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、肌肉、小肠、胎盘和脑），分别提取DNA和RNA。 用于组织表