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苏云金芽胞杆菌质粒p26复制功能区的克隆-华中农业大学学报
第 卷 第 期 华 中 农 业 大 学 学 报
30 5 Vol.30 No.5
年 月 ,
2011 10 JournalofHuazhon A riculturalUniversit Oct.2011558~562
g g y
苏云金芽胞杆菌质粒 p26 复制功能区的克隆
季思思 朱义广 彭东海 阮丽芳 孙 明
,
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室 武汉 430070
,
摘要 利用特异引物从基因组 文库筛选到 个 的片段 对该片段测序比对分析发现可能含有
BAC 1 35kb
。 , ,
p26的复制区 为了验证该片段中是否含有 p26的复制区 首先 将大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌穿梭载体
, ; ,
用 酶切切掉苏云金芽胞杆菌复制子后 自连 获得复制子克隆载体 随后 将
pHT304 EcoRⅠ pHT304E 12kb
, ,
EcoRⅠ片段亚克隆到载体pHT304E上电转化无晶体突变株BMB171获得具有抗性的转化子 证明该片段具有
。 。 ,
复制功能 缺失实验证明最小复制功能区包含 个必需的 经过 代无抗培养 最小复制区复制稳定性
2 ORF 40
达到 90%以上。
; ; ; ; ; ;
关键词 苏云金芽胞杆菌 质粒 特异引物 细菌人工染色体文库 克隆 复制子 缺失突变
中图分类号 文献标识码 文章编号 ( )
Q754 A 1000-2421201105-0558-05
苏云金芽胞杆菌( )中包 白是一类 / 聚合酶超家族的马达
Bacillusthuriniensis FtsZtubulinGTP
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含着极其丰富的
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