葡萄糖脱氢酶温控表达菌株的构建及其发酵工艺-天津科技大学学报.PDFVIP

第 31 卷 第 2 期 天津科技大学学报 Vol. 31 No. 2 2016 年 4 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Apr. 2016 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 葡萄糖脱氢酶温控表达菌株的构建及其发酵工艺 李 杨，张志萌，董自星，王正祥，路福平 (工业发酵微生物教育部重点实验室，工业酶国家工程实验室，天津市工业微生物重点实验室， 天津科技大学生物工程学院，天津 300457) 摘 要 ：膜结合型的吡咯喹啉醌依赖性葡萄糖脱氢酶 (mPQQGDH ，EC )是一种重要的氧化还原酶 ，因其在血糖 诊断及葡萄糖传感器中的重要应用而受到广泛的关注 ．但是其低表达水平限制了这种酶的大规模工业化生产及应 用．本文利用 λ 噬菌体的温敏型启动子 PL-PR 替换葡萄糖脱氢酶基因的启动子 ，构建了重组菌大肠杆菌 (E. coli)B0013- 120/pGCd：：Km-PL-PR ，并使重组菌的酶活比原始菌株提高了 21.2%,．再通过发酵条件的优化 ，确定了 mPQQGDH 的 最适诱导表达条件为 ：以甘油为碳源、诱导温度 42,℃、诱导时间 4,h 、诱导前菌体密度 A600 ＝1.6．最后对该酶的酶学性 质进行了分析 ，其最适反应温度和 pH 分别为 25,℃和 6.0 ，所得 mPQQGDH 的热稳定性 45,℃条件下可维持稳定的 活性．这为葡萄糖脱氢酶更广泛的应用及工业化生产奠定了基础． 关键词 ：葡萄糖脱氢酶；温敏型启动子；高效表达；发酵工艺优化 中图分类号：Q93 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-6510 (2016)02-0013-07 Construction of a Recombined Bacterium for the Thermo-regulated Expression of Glucose Dehydrogenase and the Optimization of the Fermentation Process LI Yang ，ZHANG Zhimeng ，DONG Zixing ，WANG Zhengxiang ，LU Fuping (Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology ，Ministry of Education ，National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes ，Tianjin Key Laboratory of Industrial Microbiology ，College of Biotechnology ，