饲料中色氨酸的测定-山东畜牧兽医局.PDFVIP

ICS 65.120 B 46 备案号： DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 1423—2009 饲料中色氨酸的测定 Determinationoftryptophaninfeedstuffs 2009-12-14发布 2010-01-01实施 山东省质量技术监督局 发 布 DB37/T 1423—2009 前 言 本标准由山东农业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（济南）。 本标准主要起草人：张红、王文正、黎秀卿、张海松、王峰恩、秦宏伟、姜国华。 I DB37/T 1423—2009 饲料中色氨酸的测定 1 范围 本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定饲料中色氨酸的方法。 本标准适用于配合饲料、预混料、浓缩饲料和单一饲料中色氨酸含量的测定。 本方法最低检出限为10pmol。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单 （不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 饲料中的蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的色氨酸，经氨基酸自动分析仪分析测定色氨酸含 量。 4 试剂与材料 4.1 除另有说明，仅使用分析纯试剂；水为GB/T 6682规定的二级水。 4.2 水解液：将20g氢氧化钠用5%SnCl 溶解并定容至100 mL，临用前配置。2 4.3 柠檬酸钠缓冲液，pH2.2：称取柠檬酸三钠19.6g，用水溶解后加入优级纯盐酸16.5mL，硫二甘醇 5.0 mL，苯酚1g，加水定容至1000mL，摇匀，用G4垂熔玻璃砂芯漏斗过滤，备用。 4.4 6mol/L 的盐酸溶液： 将优级纯盐酸与水等体积混合。 4.5 高纯氮气：纯度99.99%。 4.6 L-色氨酸，色谱纯。 4.6.1 标准溶液配制 L-色氨酸标准溶液：准确称取L-色氨酸20.4mg用2mL2%的氢氧化钠溶液溶解，再用水定容至100mL， 贮冷暗处备用，该溶液浓度为2umol/mL；临用时用pH2.2缓冲液 （4.3）稀释20倍后作标准液，浓度 为0.1umol/mL。 5 仪器 5.1 分析天平：精确至 0.0001g。 5.2 恒温干燥箱。 5.3 水解管：耐压硬质玻璃管，体积20-30mL，用去离子水冲洗干净并烘干。 5.4 酒精喷灯。 5.5 氨基酸自动分析仪：茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪，分辨率大于90%。 6 试样制备 取有代表性的试样，按四分法缩减至25g左右，粉碎并过0.25mm孔径筛，充分混匀后装入密闭容 器中备用。 7 测定步骤 1 DB37/T 1423—2009 7.1 样品前处理 准确称取蛋白含量在7.5-30mg的试样（约50-100mg，精确到0.0001g）于水解管中，加入5mL水 解液 （4.2），通高纯氮气搅动，以排除空气，再加5mL水解液冲下管壁上附着的样品。