动物不安全因素1.ppt

动物用疫苗不安全因素和解决方法 王 栋 研究员 中国兽医药品监察所 一.动物用疫苗不安全因素和解决方法 二.耐热冻干保护剂及冷冻干燥技术 三.检验和生产用培养基的研究 四.动物用狂犬病纯化冻干灭活疫苗的研究 一.动物用疫苗不安全因素和解决方法 1.动物用疫苗不安全因素和解决方法 2.动物疫苗的质量控制 3.传代细胞培养注意的几个问题 不安全因素 外毒素 热 源 异体蛋白 内毒素(ET)- LPS：革兰氏阴性菌 蛋 源 血 清 环 境 蛋源 疫苗生产用鸡蛋； SPF蛋：非致病性沙门氏菌、大肠杆菌污染； 非免疫蛋：鱼粉沙门氏菌污染，定期投抗生素，减少输卵管炎，蛋壳钙质、畸形蛋； 禽流感疫苗生产用种蛋。 疫苗污染ET后注射动物的临床反应 肿头、肿脸、停食停水、局部炎症、休克、死亡； 生产性能降低； 免疫功能下降，易发病，对疫苗应答下降。 细菌内毒素对细胞培养的影响 改变细胞外形； 活化细胞产生信息传递物质，并影响其下游生物途经反应；使敏感细胞变成不敏感细胞； 抑制维生素活性； 影响细胞附着力。 LPS的自发释放 内毒素（ET）主要成分是脂多糖（LPS）； 抗菌药物诱导细菌释放内毒素； 抗菌药物诱导LPS释放的动物实验研究； 抗菌药物诱导LPS释放的临床研究； 应用抗生素导致疫苗中内毒素的释放 庆大霉素、环丙沙星、青霉素、链霉素； 兔大肠杆菌性脑膜炎—头孢噻啶、氯霉素、庆大霉素，在24h内脑脊液中内毒素升高2—10倍； 兔死亡是由大量使用抗生素，大肠杆菌裂解，大量细菌内毒素释放引起的死亡； 解决方法 减少污染：原材料的污染和操作污染； 减少动物源性物质的依赖性； 改进生产工艺（内毒素的消除）； 抗内毒素药物； 解决方法—抗内毒素药物 内毒素抗体； 内毒素结合蛋白（高密度脂蛋白）； 多粘菌素B、妥布霉素； 类脂A结构类似物：E5531； 抗细胞因子药物 如: 腺苷类药物氯氨酮等； 糖皮质激素类：地塞米松 抗内毒素中药：青蒿素 黄连解毒汤 氨基酸：甘氨酸 乳果糖 胆 盐 多粘菌素B和甘氨酸联合拮抗内毒素 多年菌素B+甘氨酸在疫苗中使用浓度 2ugPMB+20mgGly/ml ET100u时 兔体温升高 ET（100u时）+2ugPMB+20mgGly/ml 无体温反应 ET（110u/ml）+ Gly + PMB （38u/ml） 鸡传染性鼻炎、大肠杆菌等灭活疫苗中应用 内毒素的消除—物理方法 超滤； 石棉及活性炭吸附； 离子交换层析； 亲和层析 （运用抗内毒素抗体）； 2. 动物疫苗的质量控制 疫苗生产用毒种 生产用细胞（原代细胞、传代细胞） 疫苗生产工艺 灭活剂 抗生素 血清 佐剂 疫苗生产用毒种 原始种子：①我国自行分离 ②从国外引进 建立3批种子批——主种子批和工作种子批； 主种子批——原始种子批扩增而来； 工作种子批——从主种子批扩增而建立，三级种子均须按《中国兽药典》要求检验； 疫苗生产用细胞 原代细胞要求： 一般1～5代内，细胞培养用牛血清、胰蛋白酶、培养基等材料应符合《中国生物制品主要原材料质控标准》要求； 疫苗生产的每批细胞均应作外源因子检测、细菌、真菌和支原体检查，均应阴性； 传代细胞的要求： ① 细胞库的建立 细胞库体系——使每批产品的起始材料具有一致性 细胞库通常为二级管理，由主细胞库和工作细胞库组成； 传代细胞传到一定代次后，致瘤性会增强，需进行致瘤性检查和细胞核型分析； ② 细胞的鉴定 细胞鉴别 外源因子污染 致瘤性 细胞核型或染色体检测 外源病毒 生产工艺 病毒培养采用生物反应器； 细胞与毒种的驯化； 病毒保护剂； 抗原浓缩、纯化技术； 细菌培养采用生物发酵技术； 半合成培养基与菌种的驯化； 连续离心去除培养基成分； 保护性抗原的检测。 工程化管道化生产工艺； 耐热保护剂与冷冻干燥技术； 佐剂与乳化技术； 基因工程技术； 灭活剂 福尔马林 福尔马林与病毒蛋白的作用初期仅形成羟甲基化合物，其反应是可逆的，但一旦形成交链后则为不可逆的。福尔马林作用蛋白的结果是病毒发生交联作用或是病毒颗粒凝集； 同时，这种作用限制了福尔马林作用于核酸的灭活，因此，在某些情况下尽管病毒抗原已遭到了严重破坏但仍然会有一些病毒存活； 致癌作用，不安全；